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microRNA-497在肾小球系膜细胞焦亡中的作用及机制
目的:探讨microRNA-497 (miR-497)对高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡的调控作用. 方法:高糖和胰岛素处理人肾小球系膜细胞(HRMC),在不同时间运用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC细胞中miR-497表达水平;转染不同浓度miR-497 mimic,检测细胞焦亡通路关键基因mRNA表达水平,运用Western印记检测NLRP1蛋白的表达水平;运用生物信息学和萤光素酶报告基因技术预测并验证miR-497对炎性小体NLRP1基因的靶向结合作用;miR-497 mimic和pcDNA-NLRP1分别单独转染或共转染后检测细胞增殖.结果:高糖和胰岛素处理48 h以上HRMC细胞焦亡水平显著增加(P＜0.05),miR-497表达水平显著降低(P＜0.05);miR-497 mimic转染显著抑制HRMC细胞焦亡,和焦亡通路关键基因IL-1β、TNFα和caspase-1表达水平下降(P＜0.05);miR-497可直接靶向作用于NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表达;NLRP1过表达可消除miR-497对细胞焦亡的抑制作用. 结论:miR-497 mimic抑制高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡.
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原发性肝癌组织MicroRNA-497表达及与患者临床特征和生存率的关系
目的:回顾性分析microRNA-497(miRNA-497)在原发性肝癌(HCC)患者癌组织中的表达及与患者临床特征和生存率的关系.方法:收集2010-01—2010-10接受手术治疗的61例HCC患者,采用荧光定量PCR检测其癌组织及癌旁组织miRNA-497的相对表达量.以癌组织miRNA-497相对表达水平的中位数为界限,将61例患者分为miRNA-497高表达组(n=21)和miRNA-497低表达组(n=40).比较癌组织与癌旁组织miRNA-497水平差异;同时分析miRNA-497高表达组与miRNA-497低表达组临床特征和预后危险因素;比较两组平均生存率和累计生存率的差异.结果:miRNA-497在癌组织中的表达明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).HCC患者癌组织miRNA-497低表达组血清AFP水平、肿瘤大小、TNM分期、血管侵犯与高表达组分布差异有统计学意义(P<0.05).多因素回归分析显示血管侵犯、TNM分期、miRNA-497表达量是影响HCC患者预后的独立危险因素.Kaplan-Meier分析表明,miRNA-497低表达组平均生存期明显低于高表达组(19.0个月vs 33.3个月),1年、3年、5年累计生存率也较miRNA-497高表达组明显降低(55.0%vs 71.4%、20.0%vs 42.9%、15.0%vs 37.5%,P<0.05).结论:miRNA-497在HCC组织中的低表达提示预后不良.
关键词： 原发性肝癌 microRNA-497 生存率 -
MicroRNA-497对人膀胱癌EJ细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨microRNA-497(miR-497)对人膀胱癌EJ细胞增殖和凋亡的影响.方法 将人膀胱癌细胞株EJ分为4组:miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor、inhibitor NC;通过脂质体Lipfectami-neTM 2000介导将miR-497 mimics、mimics NC、miR-497 inhibitor、inhibitor NC瞬时转染至上述4组细胞中,转染6 h后,在荧光显微镜下观察转染效率;转染48 h后,采用qRT-PCR技术检测各组细胞中miR-497的表达;平板克隆实验和噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达变化.结果 荧光显微镜下观察结果显示:各组细胞转染效率均>90%;qRT-PCR结果显示:与各自阴性对照组相比,转染miR-497 mimics组,EJ细胞中miR-497表达明显增加(P<0.01),而转染miR-497 inhibitor后表达明显下调(P<0.01).过表达miR-497后,EJ细胞的增殖能力较阴性对照组明显减弱(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01);而抑制miR-497表达后,EJ细胞的增殖能力较阴性对照组明显增强(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.01).Western blot结果示:与阴性对照组相比,过表达miR-497可使EJ细胞的Bcl-2表达降低(P<0.01),Caspase-3表达增加(P<0.01).结论 miR-497可抑制膀胱癌EJ细胞增殖,促进其凋亡,可能与影响Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关.
关键词： 膀胱肿瘤 microRNA-497 增殖 凋亡
