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雷替曲塞对微卫星高度不稳定的结肠癌细胞凋亡的作用及临床意义
目的 研究雷替曲塞对微卫星高度不稳定性(MSI-H)结肠癌细胞株LOVO增殖、凋亡的作用及分子机制.方法 取对数生长期的MSI-H结肠癌细胞株LOVO细胞,经10％ FBS的DMEM完全培养基培养后,分别加至60 μM雷替曲塞(雷替曲塞组)和2μg/ml 5-氟尿嘧啶(5-FU)(5-FU组)的完全培养基培养,同时设置不加药物的空白对照组.采用CCK-8法检测雷替曲塞及5-FU对LOVO细胞增殖的影响;采用FITC-AnnexinV-PI染色法和流式细胞仪检测雷替曲塞及5-FU作用于LOVO细胞24 h后对细胞凋亡的影响;Western Blot法检测雷替曲塞及5-FU作用24h后凋亡相关蛋白-B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3前体(Pre-caspase 3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)等蛋白在LOVO细胞中的表达水平.结果CCK-8法细胞增殖实验检测结果显示,与对照组比较,雷替曲塞作用后细胞的增殖明显受到抑制,其中在72 h明显(P均＜0.05),而5-FU组无变化(P＞0.05).FITC-Annexin V-PI染色结果显示,与对照组及5-FU组相比,雷替曲塞作用于LOVO细胞24h后,细胞早期凋亡数目和晚期凋亡数目均增加,差异有统计学意义(P均＜0.05).流式细胞术检测显示,与对照组比较,雷替曲塞组的细胞凋亡率明显增高(P＜0.05),5-FU组无变化(P＞0.05).Western Blot检测结果显示雷替曲塞组的促凋亡蛋白cleaved-caspase3、Bax蛋白的表达水平明显增加,而抑制凋亡蛋白Bcl-2、Pre-caspase3蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05).结论 雷替曲塞可促进MSI-H结肠癌细胞的凋亡,为雷替曲塞对结肠癌的治疗提供了参考依据.
