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Vinexin-β基因敲除在小鼠心肌梗死后心脏重构中的作用
目的 采用野生型(WT)小鼠和Vinexin-β基因敲除(KO)小鼠建立心肌梗死(MI)模型,研究Vinexin-β在心肌梗死后心脏重构中的作用及机制.方法 分别以WT和KO小鼠为实验对象,采取结扎左冠状动脉前降支的方法建立小鼠MI模型(WT-MI组,n=34;KO-MI组,n=27);只在前降支处穿过一支短丝线不做结扎的假手术组(WT-Sham组,n=12;KO-Sham组,n=15).术后7d采用HE染色评价MI面积,超声心动图检测心功能,生物信号采集处理系统监测血液动力学指标.原位末端标记(TUNEL)染色法检测MI周边区心肌细胞凋亡,Western blot法检测MI周边区抗凋亡基因Bcl-2、caspase-3和促凋亡基因Bax、caspase-3 cleavage的蛋白表达水平及核转录因子(NF)-κB通路中IκBα和p65蛋白磷酸化(p-IκBα,p-p65)及其总蛋白(T-IκBα,T-p65)水平;免疫荧光实验检测MI周边区的T淋巴细胞(CD3+)、中性粒细胞(LY6G+)及巨噬细胞(MAC1+)等炎症细胞浸润程度.从小鼠存活率、心功能、病理分析及分子生物学等途径来评价Vinexin-β在MI后心脏重构中的作用.结果 与WT-MI组相比,KO-MI组可提高小鼠的存活率(81.48％ vs 50.00％,P＜0.05),减小MI面积[(7.62±1.08)％ vs(15.48±1.24)％,P＜0.05]和改善心功能.TUNEL染色显示,KO-MI组梗死周边区的凋亡细胞较WT-MI组减少[(0.75±0.12)％ vs(1.07±0.48)％,P＜0.05].Western blot法显示,KO-MI组梗死周边区抗凋亡基因Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平较WT-MI组升高(P均＜0.05);促凋亡基因Bax和caspase-3 cleavage蛋白表达水平较WT-MI组降低(P均＜0.05);KO-MI组的p-IκBα、T-p65和p-p65蛋白表达水平较WT-MI组显著降低,T-IκBα水平显著升高(P均＜0.05),提示IκBα和p65的磷酸化水平受到抑制.免疫荧光染色显示,KO-MI组梗死周边区的T淋巴细胞、中性粒细胞及巨噬细胞等炎症细胞数量较WT-MI组减少(P均＜0.05).结论 Vinexin-β基因缺失可减轻小鼠MI周边区的炎症和凋亡反应,从而减小MI面积和改善心功能,因此可提高小鼠MI后的存活率.
