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半透明带结合试验文献资料
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人卵透明带蛋白ZP3a和ZP3b肽段的免疫原性及其抗血清体外抑制人精子-半透明带结合
分析大肠杆菌表达的重组人卵透明带-3(r-huZP3)蛋白两个肽段(r-huZP3a22～176及r-huZP3b177～348)的免疫原性,比较两者抗血清体外抑制人精子-半透明带结合的能力.以制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化的大肠杆菌表达蛋白为抗原,主动免疫新西兰兔产生抗huZP3a22～176及huZP3b177～348抗血清;通过ELISA测定比较两者的抗体应答水平;以蛋白印迹和免疫组化方法测定两者抗血清同重组表达蛋白、天然人卵ZP以及卵巢组织的反应性;通过竞争性半透明带结合试验(hemizona assay,HZA)观察两者抗血清体外抑制人精子-ZP结合能力.结果显示:未与大分子蛋白载体耦联的r-huZP3a22～176和r-huZP3b177～348抗原都在免疫兔中产生了较高的抗体滴度,而且它们的抗血清可识别大肠杆菌表达的各自重组ZP3肽以及人卵细胞表面天然ZP,两者抗血清也都能在体外抑制人精子-ZP结合.由此可见,r-huZP3a22～176及r-huZP3b177～348蛋白具有良好免疫原性,所产生抗血清也都显示出细胞和组织特异性.因此,单一或合并两个huZP3肽段均可作为抗原研制检测不明原因性不孕妇女中是否存在抗自身ZP抗体的诊断试剂盒,另外它们的抗血清也能用于鉴定已知huZP3表位肽段的小B-细胞表位基序.
