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羧基肽酶E(CPE)在人乳腺腺癌中的表达和功能
目的 观察乳腺腺癌中羧基肽酶E(earboxypeptidase E,CPE)介导的神经内分泌肽加工和表达.方法 使用RT-PCR、免疫组化、ELISA和Western blot等方法,比较CPE和生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)基因和蛋白质水平在42例乳腺癌和21例癌旁正常组织中的表达.结果 乳腺癌组织中的CPE基因表达水平为1 024±237,而癌旁正常组织中CPE基因表达水平为805±83 (P＜0.01).与乳腺癌旁正常组织比较,癌组织中CPE蛋白质显示了较高的表达(P＜0.01).乳腺癌组织中的GHRH基因表达水平为1 522±457,而癌旁正常组织中为1 067±437,差异有统计学意义(P＜0.01).与乳腺癌旁正常组织比较,癌组织中GHRH蛋白表达被上调(P＜0.01).结论 癌组织中CPE和GHRH高表达提示癌细胞中存在较强的由CPE酶介导的神经内分肽转录后加工能力.
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重组生长激素释放激素GHRH的纯化及活性测定
目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达重组生长激素释放激素(GHRH),检测其生物学活性.方法将重组表达质粒pET-28a/L-ansB-GHRH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达.经裂解细胞、洗涤、乙醇沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G25柱层析等方法纯化GHRH.用人生长激素放免试剂盒检测GHRH多肽的活性.结果SDS-PAGE分析显示重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右.经抽提、酸水解、层析等方法表明纯化倍数达147倍,多肽收率为0.68%.通过电喷雾质谱测得多肽的相对分子质量为5235.25,与理论计算值相吻合.多肽的纯度经SDS-PAGE测定为单一峰.GHRiH三组刺激实验组与空白对照组相比之间差异显著(P＜0.01),且随着剂量增加,差异明显增加.结论体外重组GHRH多肽具有较高的生物学活性.
关键词： 生长激素释放激素(GHRH) 纯化 融合蛋白 包涵体
