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流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用
目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针roGFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值.方法·用roGFP2转染HeLa细胞,经H2O2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测roGFP2,以405nm/488nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态.转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的roGFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同.结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H2O2引起的roGFP2变化,且可区分群体中不同的亚群.Panc-1细胞中CD24+/CD44+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,roGFP2比值更低,细胞处于更还原的状态.结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中.
关键词： 流式细胞术 细胞氧化还原状态 基因编码荧光蛋白探针 roGFP2 肿瘤干细胞
