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人TACI-linker-BR3双受体融合基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建人双受体融合基因真核表达载体--pcDNA3.1(+)-TACI-linker-BR3-IgGFc,观察其在COS-7细胞中的表达.方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染COS-7细胞,通过Western印迹、ELISA以及免疫组化方法,检测目的蛋白的表达及其与BAFF、APRIL蛋白相互作用情况.结果:融合基因在瞬时转染的真核细胞中获得表达,并分泌至上清,转染效率能达到48%,融合蛋白能与BAFF、APRIL蛋白有效结合而且融合蛋白中分子标签IgGFc未影响双受体融合蛋白的结构及其生物学活性.结论:人TACI-linker-BR3双受体基因与IgGFc融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性,为进一步探讨SLE等自身免疫疾病的发病机制和生物学治疗方法奠定了基础.
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食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的检测及临床意义
目的 检测食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平,分析其与手术疗效的关系.方法 收集食管癌患者和体检健康者的外周血标本,用Ficoll试剂提取单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测术前、术后1d、术后7d的食管癌患者及体检健康者调节性B细胞(包括B10、Br3及Breg)的表达水平.结果 食管癌患者CD5+ CD19+细胞、B10细胞和Breg细胞表达水平分别为(3.20±0.35)％、(2.52±0.37)％和(8.39±0.92)％,均高于健康人对照组(1.77±0.25)％、(1.57±0.28)％和(2.96±0.23)％,差异有统计学意义(P均＜0.05),而Br3细胞(6.07±0.46)％与健康人对照组(5.93±0.28)％比较差异无统计学意义(P＞0.05);与术前比较,食管癌患者B10、Br3细胞术后1d表达水平明显升高,Breg细胞表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05),而术后7d与术前比较,CD5+ CD19+细胞、B10和Breg细胞差异均有统计学意义(P均＜0.05);与术后1d与术后7d比较,仅CD5+ CD19+、B10、Br3细胞表达水平差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平呈现动态变化,可用于手术疗效监测.
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狼疮性肾炎患者血清和肾内B淋巴细胞刺激因子及BR3的表达
目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用.方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的表达水平.结果 SLE患者血清Blys、TNF-α以及IL-1的水平显著高于正常对照者(P<0.01);正常对照者的肾小管上皮细胞可中等强度表达BlyS,而LN患者除了肾小管上皮细胞外,肾小管间质浸润的炎性细胞也可表达Blys;正常对照肾组织内无BR3的表达,而LN患者肾组织内有极少BR3的表达,仅见于炎性细胞聚集区;LN患者肾内BlyS的表达水平显著高于正常对照者(P<0.01),且Ⅳ型与Ⅴ型LN肾内BlyS的表达水平均明显高于Ⅲ型LN(P<0.05),而Ⅳ型与Ⅴ型LN间BlyS的表达水平虽差异无统计学意义,但有升高趋势.结论 SLE患者血清BlyS的水平升高,LN患者肾内BlyS的表达水平升高,肾内BR3受体有极少量的表达,提示BlyS及其BR3的变化与LN的病理变化有关.
