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Brevican基因敲除小鼠的制备
制备brevican基因敲除小鼠.方法 采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体.线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子.PCR法鉴定小鼠的基因型.结果 将PGK启动子指导的NEO表达框敲进Bcan第3外显子,敲除第3~8外显子序列,得到打靶载体,上游臂为2.4 kb,下游臂为4.8 kb.基因打靶后,得到双臂均发生正确同源重组的克隆数14个.利用阳性ES细胞克隆注射入囊胚,得到3只嵌合率大于50%的雄鼠,繁育得到6只Brevican-/-纯合子小鼠.结论 利用同源重组方法,成功敲除干细胞靶基因,建立Brevican-/-建系小鼠.
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Brevican在脑胶质瘤中表达上调的研究进展
Brevican是近年来新发现的中枢神经系统细胞外基质中的硫酸软骨素蛋白聚糖,其表达仅限于中枢神经系统.近年来的研究表明,Brevican在正常成年动物及人脑中均有表达但其水平均较低,而在脑胶质瘤中具有相当高的表达并与其侵袭性有关,且在中枢神经系统其他肿瘤中均未发现其表达异常增高的现象.因此,研究其分子结构、在脑中的表达及在胶质瘤中的表达,能够为胶质瘤的诊断与治疗提供一条新途径.