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不同因子对大鼠牙源性间充质细胞成牙本质分化的影响
目的:探讨bFGF、IGF1、BMP4、TGF-β1联合应用对大鼠牙源性间充质细胞(rat dental mesenchymal cells,rDMCs)成牙本质分化的影响.方法:应用酶消化法和差速消化法分离、培养大鼠牙源性上皮细胞(rDECs)和rDMCs,经cytokeratin、vimentin免疫荧光染色鉴定其来源.应用茜素红染色、Gomori钙-钴法检测矿化液诱导下rDMCs的矿化能力.应用免疫组织化学染色、图像分析、实时荧光定量PCR和Western印迹法检测在bFGF+IGF1(组1)、TGF-β1+BMP4(组2)、bFGF+IGF1 +TGF-β1 +BMP4(组3)分别诱导下rDMCs中DSPP、CAP、OPN、OCN的表达差异.采用SPSS14.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成功分离培养、鉴定rDECs和rDMCs,经矿化液诱导后的rDMCs钙结节和ALP染色阳性.组1、2中,DSPP、CAP、OPN、OCN mRNA和蛋白的表达水平均显著高于空白对照组4,差异显著(P＜0.01),其中组1 CAP、OCN和组2 DSPP、OPN的表达水平高.结论:rDMCs经矿化诱导后具有成骨特性.bFGF+IGF1显著促进CAP、OCN的表达,加速rDMCs向成牙骨质细胞、成骨细胞分化与牙骨质基质、骨基质的矿化;TGF-β1+BMP4显著促进DSPP、OPN的表达,加速rDMCs向成牙本质细胞、成骨细胞分化与牙本质基质、骨基质的矿化,显示其成骨趋向.4种因子联合应用,并不具备显著的协同作用.
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大鼠牙源性细胞复合nHAC/PLA支架体内构建牙体组织—骨复合体样结构的研究
目的:探讨不同组合生长因子诱导的大鼠牙源性上皮细胞(rDECs)、间充质细胞(rDMCs)复合nHAC/PLA支架体内形成牙体组织—骨复合体样结构的能力.方法:应用酶消化法和差速消化法分离培养rDECs和rD-MCs,免疫荧光染色鉴定其来源.将各组细胞—支架复合物移植裸鼠皮下3月、5月后分别取材,检测移植物形成牙体组织—骨复合体样结构能力.结果:成功分离培养、鉴定大鼠牙源性上皮细胞和间充质细胞.细胞—支架复合物移植后3月,组①、②、③在细胞—支架接触部位均发现类骨质、新生成熟骨和血管形成,并有OCN、OPN的阳性表达.组②促成骨作用强.对照组④没有新生骨形成,仅有少量胶原纤维和血管.移植后5月,组①、③均形成没有髓腔的牙根样结构,部分区域有DSPP、DMP1、CAP表达.组②形成周边有新生骨、中央有单根牙体样组织,中心为含有牙髓样组织和血管的髓腔样结构,并有DSPP、DMP1、OPN、OCN在髓腔内壁牙本质基质、部分牙髓样组织和血管内的阳性表达,ameloblastin、CAP分别在釉质样、牙骨质样组织中表达阳性.对照组④形成新生骨,OCN强阳性表达,未形成牙体样结构.结论:经TGF-β1+BMP4诱导的rDECs+rDMCs-nHAC/PLA体内移植物促成骨和成牙作用强,移植后5月形成牙体组织—骨复合体样结构.
