首页 > 文献资料
-
p62dok-PTB结构域样新基因片段的克隆
利用RT-PCR方法,从胎儿脾脏和肝脏组织中克隆出一个342bp的基因片段,并测定了其核苷酸序列.在基因库中未见相同序列报道,但该片段与p62dok-PTB结构域核苷酸序列有93%的同源性,提示它是一种新的p62dok-PTB结构域样基因片段.
-
p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化
目的:制备p62Dok PTB结构域的GST融合蛋白.方法:用PCR方法扩增编码p62Dok PTB结构域的cDNA, 并将其克隆入表达载体pGEX-4T-3 中,转化大肠杆菌BL-21,构建成表达GST-PTB融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,经Glutathion-Sepharose 4B亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE进行分析,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的25%.结果:获得重组GST-PTB融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%.结论:成功制备高纯度p62Dok PTB结构域的GST融合蛋白,为进一步研究p62Dok PTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础.
-
p 62dok酪氨酸磷酸化与STZ大鼠类Ⅰ型糖尿病关系的研究
为探讨p62dok在链脲酶素大鼠类Ⅰ型糖尿病中的变化和作用,采用STZ复制大鼠类Ⅰ型糖尿病,实验分正常对照组、链脲酶素类Ⅰ型糖尿病组和pervanadate治疗组.以免疫沉淀和蛋白印迹检测p62dok和p21rasGAP及两者关系,同时观察体重和血糖的变化,并利用SDS/PAGE检测肝、骨骼肌和脂肪组织中蛋白组成的变化.结果显示,链尿酶素组大鼠脂肪组织中酪氨酸磷酸化的p62dok量明显降低,同时大鼠体重减轻,血糖明显升高,脂肪组织蛋白组成发生变化;而骨骼肌和肝组织蛋白组成未见明显异常.pervanadate可升高酪氨酸磷酸化的p62dok量,并明显降低血糖浓度,恢复脂肪组织蛋白组成.三组间p21rasGAP含量无明显变化.
关键词： p62dok p21ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白 链尿酶素 类Ⅰ型糖尿病 大鼠 -
p62dok在脂质诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用
目的:探讨p62dok在脂质诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用及其可能的机制.方法:利用小鼠高脂饮食模型,观察p62dok表达与胰岛素信号转导在小鼠肝脂肪组织中的变化;利用游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,采用基因沉默方法,探讨p62dok表达量对胰岛素信号转导的影响.采用蛋白免疫印迹法检测蛋白和磷酸化蛋白表达.结果:在高脂饮食处理的小鼠脂肪组织和游离脂肪酸处理的3T3-L1脂肪细胞中,p62dok的表达量显著增加,同时胰岛素诱导的AKT磷酸化降低.通过基因沉默方法降低p62dok表达可增加游离脂肪酸处理的3T3-L1脂肪细胞的AKT磷酸化,这一变化可被Ras抑制剂Manumycin A和PI3K抑制剂LY294002抑制,但不受MEK抑制剂U0126的影响.敲减p62dok对IRS-1酪氨酸磷酸化无明显影响.结论:脂质诱导的p62dok高表达可通过抑制Ras/PI3K/AKT信号通路导致脂肪细胞的胰岛素抵抗.
