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RNA干扰对阿尔茨海默病家族性瑞典型APP突变的沉默作用
目的诱导小干涉RNA(small interference RNA,siRNA)对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用.方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞,利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用.结果siRNA可有效地下调突变型APP,相比APPwt而言,针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强.结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因,并有一定的等位基因特异性.因此,针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色.
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利用siRNA抑制HER-2表达的研究
目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达.方法针对HER-2 mRNA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2 mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达.结果 siRNA 3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2 mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA 2P 和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少.结论靶向HER-2 mRNA 的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗.
关键词： HER-2 小干涉RNA(siRNA) 乳腺癌 -
敲低小胶质细胞中过氧还原素6(PRDX6)降低氧糖剥夺再复氧神经元的存活
目的 观察敲低小胶质细胞中过氧还原素6(PRDX6)对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)神经元存活的影响.方法 小胶质细胞采用PRDX6-siRNA慢病毒感染,同时培养基中加入非Ca2+依赖性磷脂酶A2(iPLA2)活性抑制剂MJ33,24 h后与原代神经元共培养,并进行OGD/R处理.实验分为正常组、OGD/R组、阴性对照siRNA处理的OGD/R组、PRDX6-siRNA处理的OGD/R组、PRDX6-siRNA联合MJ33处理的OGD/R组.Western blot法检测小胶质细胞PRDX6蛋白的表达,实时定量PCR检测小胶质细胞PRDX6 mRNA的表达.ELISA检测iPLA2活性;MTS、乳酸脱氢酶(LDH)法检测神经元的存活率;采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以反映神经元的氧化应激水平.结果 与OGD/R组比较,PRDX6-siRNA处理的神经元存活率降低,MDA增加、SOD降低、氧化应激损伤加重;与PRDX6-siRNA组比较,同时加入iPLA2活性抑制剂M J33组神经元存活率增加,MDA降低、SOD增加、氧化应激水平下降.结论 小胶质细胞PRDX6对神经元氧糖剥夺损伤有保护作用,而iPLA2活性对PRDX6的作用有影响.
