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单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能
目的:探讨单细胞克隆肝癌干细胞(liver cancer stem cell,LCSCs)向间充质样细胞分化的潜能.方法:通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆,采用RT-PCR法鉴定干细胞标志物;将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培养3周后,采用Real-time PCR及特殊染色技术比较诱导前后LCSC表达成骨、软骨及脂肪细胞特异标志物的差异.结果:单细胞克隆的LCSC表达多种干细胞标志物、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、干细胞因子受体、C-kit、巢蛋白(nestin)、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette sub-family G member2,ABCG2)、CD133.分化诱导培养3周后,成骨方向诱导的细胞茜素红染色呈现橘红色钙结节形成,软骨方向诱导的细胞阿尔新蓝染色显示蓝色蛋白多糖沉积,脂肪方向诱导的细胞油红O染色显示大量脂滴形成.Real-time PCR结果显示,诱导后成骨细胞特异标志物骨钙素和Ⅰ型胶原、软骨细胞特异标志物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原、脂肪细胞特异标志物脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达均较对照组显著上调(Ⅰ型及Ⅱ型胶原间为P＜0.05,其他指标间均为P＜0.01).结论:LCSC具有可塑性,在特定的微环境下具有向间充质样细胞分化的潜能.
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人脐血间充质样细胞体外培养的形态学变化
目的:分离培养人脐血间充质样细胞,观察其形态学的变化.方法:取新鲜采集脐带血,用1.077 g/cm3的淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离脐血单个核细胞.将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养.于不同时间观察细胞形态的变化.结果:从脐血中可以分离出单个核细胞;培养3 d出现大量的造血细胞集落,瑞氏染色显示粒-巨噬系集落形成单位与红系集落形成单位集落形成多;培养5 d出现贴壁的扁平状上皮样细胞和长梭形的成纤维样细胞,同时有大量的破骨样细胞混杂;培养1周出现上皮样细胞和成纤维样细胞的集落,此时经胰蛋白酶消化机械吹打可以传代;培养2周以上,出现上皮样细胞的克隆,镜下呈现球形样结构,折光性强.结论:脐血成分复杂,在体外分离培养可以获得形态各异的脐血间充质样细胞.
