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瘢痕疙瘩成纤维细胞低密度培养的克隆能力分析
目的：比较瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs）和正常真皮成纤维细胞（NFs）间克隆形成能力的差异，探讨瘢痕疙瘩中病理性干细胞是否存在，及其对瘢痕疙瘩发生发展的影响。方法利用酶消化法获得瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的原代细胞，以4000个/皿的密度接种，进行低密度培养，2周后观察细胞克隆的形成及形态变化。结果低密度培养条件下的瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞都可形成克隆，但KFs可形成明显的克隆集落，NFs形成的克隆不明显且松散。KFs克隆形成率高于NFs，为（0.80±0.21）%，而NFs为（0.18±0.06）%，两者间差异显著（P<0.05）。结论低密度培养条件下，瘢痕疙瘩成纤维细胞的克隆形成能力高于正常皮肤成纤维细胞，可能与瘢痕疙瘩组织中存在病理性瘢痕疙瘩干细胞有关。
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低密度培养兔骨髓基质干细胞的生物学特性
目的 探讨低密度体外培养条件下兔骨髓基质干细胞的成骨能力及对Bio-oss胶原复合的影响.方法 利用全血贴壁法培养兔骨髓基质干细胞,取第2代细胞进行不同密度的培养,观察细胞克隆的形成及形态变化.细胞消化后进行爬片,测定Stro-1+、CD44+细胞表面抗原,以流式细胞仪检测正常培养细胞CD34+、CD44+表达变化并与非低密度培养组比较.低密度培养细胞成骨诱导后,进行钙化结节诱导,同时进行碱性磷酸酶(ALP)定量测定.把诱导后的细胞与Bio-oss胶原复合,观察与载体材料的生物相容性并进行电镜扫描观察.结果 低密度培养的细胞可形成克隆,细胞爬片后CD44+、Stro-1+免疫荧光测定显示阳性,钙化结节在成骨诱导14 d后形成.低密度培养的细胞CD34+阳性率为43.83％,而正常培养的细胞CD34+阳性率为4.20％,二者间有统计学差异(P＜0.05).诱导后细胞ALP定量测定为(1.666±0.015) U/(g·prot),而非诱导细胞为(0.450±0.023) U/(g·prot),二者间有统计学差异(P＜0.05).诱导后的细胞与Bio-oss胶原复合较好,电镜扫描观察细胞表面有大量“伪足”形成.结论 低密度培养的骨髓基质干细胞可表达较强干细胞特性和成骨能力,与Bio-oss胶原复合后生长良好.
