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大鼠失神经腓肠肌细胞内FoxO3a及MuRF-1的表达规律
目的 探讨失神经大鼠腓肠肌细胞中叉头蛋白转录因子3a(fork-head protein,FoxO3a)及MuRF-1的表达规律.方法 72只Wistar大鼠随机分为12组,每组6只,切断大鼠右侧坐骨神经,左侧行假手术,分别于术后0、1、2、3、4、5、6、7、10、14、21、28d各处死一组大鼠,取右侧腓肠肌,于-70℃冰箱保存.分别使用实时荧光定量PCR法和Western Blot法对其中的FoxO3a和MuRF-1的基因和蛋白进行检测.结果 MuRF-1的基因表达在失神经第4天达到峰值(18.12倍),失神经14d后下降至正常.FoxO3a的基因表达在失神经第6天达到峰值(7.06倍),而后虽缓慢下降,但仍高表达.FoxO3a和MuRF-1的蛋白含量随失神经时间的延长逐渐升高.结论 FoxO3a和MuRF-1的表达和蛋白改变与失神经骨骼肌萎缩关系密切,可以作为药物治疗和基因治疗的靶点之一.
关键词： 肌萎缩 大鼠 失神经 叉头蛋白转录因子3a MuRF-1 -
叉头蛋白转录因子3a/p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制
目的 观察紫铆因(Butein)的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a(FOXO3a)/p27激酶抑制蛋白1(p27kip1)和氧化应激在该过程中的作用.方法 常规培养A549细胞,分别给予25、50、100 μmol/L的Butein处理24 h后,检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性、活性氧(ROS)含量、总谷胱甘肽(GSH)水平,从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞.Western blot法检测FOXO3a、p27kip1、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)的表达水平.进而采用小干扰RNA(siRNA)干扰法敲减FOXO3a表达并检测FOXO3a、p27kip1以及bax、bcl-2的表达水平,从而明确FOXO3a/p27kip1通路在该过程中的作用.结果 25、50、100 μmol/L的Butein处理A549细胞24h后,细胞活力分别下降到(78.3±4.6)％、(63.5±4.8)％和(40.1±4.1)％(t=10.330,P=0.000),细胞划痕间距增大到(120.0±8.4)％、(150.0±10.6)％和(175.0±11.1)％(t=4.777,P=0.001).Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强,ROS含量增多,总GSH减少.Western blot结果显示Butein激活了FOXO3a/p27kip1通路,上调了bax/bcl-2的比值.siRNA处理后阻断了FOXO3a/p27kip1通路,逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少.结论 Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移,该作用可能是通过激活FOXO3a/p27kip1信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的.
关键词： 紫铆因 肺腺癌 叉头蛋白转录因子3a p27激酶抑制蛋白1 氧化应激 细胞凋亡
