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人类睾丸特异表达新基因septin 12 transcript variant 2的克隆与表达分析
目的 克隆一个新的人类睾丸特异表达基因,并分析其组织表达谱.方法 运用"数据库消减杂交"(Digital Differential Display,DDD)方法筛选出在人类睾丸组织中显著高表达并代表新基因的克隆重叠群Hs.126780,对该克隆重叠群进行同源性搜索、序列匹配、延伸,获得新基因的cDNA全长序列;生物信息学方法分析和预测新基因结构和功能;多组织RT-PCR实验分析新基因的组织表达谱.结果 新基因cDNA全长为1524bp,开放阅读框为1077bp,编码蛋白质由358个氨基酸组成,基因定位于16p13.3,多组织RT-PCR证实新基因为人类睾丸特异性基因.新基因暂命名为:septin 12 transcript variant 2(SEPT12),GenBank登陆号为:EF620906.1.结论 利用数据库消减杂交等生物信息学方法和实验相结合克隆新的睾丸特异性基因高效、可行,新基因septin 12 transcript variant 2为人类睾丸特异表达基因.
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一个新的人类睾丸特异性基因-TDRG1的cDNA克隆
目的克隆一个新的人睾丸特异性基因.方法运用"数据库消减杂交"(Digital Differential Display,DDD)方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达.然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学的方法克隆一个人类新基因的全长cDNA序列.结果新基因全长1197bp,开放阅读框为504～806bp,定位于6p21.1-p21.2,编码由100个氨基酸组成,分子量为10KD,等电点为6.81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性.克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRG1(Testis Development Related Gene 1),GenBank登录号为DQ168992.结论"数据库消减杂交"与实验验证相结合用于发现更多人类功能新基因是行之有效的.
