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胰岛素样生长因子结合蛋白7基因对胃癌细胞周期和体内外增殖的影响
目的 利用过表达和干扰技术,观察胰岛素样生长因子结合蛋白7 (IGFBP7)对胃癌细胞增殖和细胞周期,以及对细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)表达的影响,构建裸鼠移植瘤模型,观察IGFBP7对胃癌瘤体生长的影响.方法 采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰胃癌细胞株MKN-28中IGFBP7表达,并建立空白对照组和阴性对照组.采用pcDNA3.1-IGFBP7质粒转染SGC-7901细胞,使之过表达IGFBP7并建立相应的空白对照组和空载体组.培养48 h,采用MTT实验和克隆形成实验检测IGFBP7干扰和过表达后胃癌细胞体外增殖情况;流式细胞术检测IGFBP7对细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测各组细胞中细胞周期素D1和CDK4.分别用过表达IGFBP7的SGC-7901稳定转染细胞及未转染SGC7901细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察20 d内IGFBP7对胃癌移植瘤体生长的影响.采用单因素方差分析、LSD法和独立样本t检验比较组间差异.结果 MTT实验和克隆形成实验发现,与空白和阴性对照组比较,干扰IGFBP7的表达能促进MKN-28细胞的增殖(3.013±0.322、2.903±0.210比4.502±0.356,F=18.31,P=0.002 8),细胞克隆形成增多,G1期细胞减少[(57.29±1.30)％、(52.27±0.90)％比(36.81±0.83)％,F=321.57,P＜0.01];与空白对照组和空载体组比较,增加IGFBP7的表达能抑制SGC-7901细胞的增殖(3.142±0.320、3.214±0.226比1.813±0.165,F=22.35,P=0.001 7),细胞克隆形成减少,使细胞周期处于G1期细胞增多[(49.34±1.20)％、(47.42±0.71)％比(57.73±0.73)％,F=109.230,P＜0.01)].蛋白质印迹法发现干扰IGFBP7能够增加细胞周期素D1和CDK4的表达,过表达IGFBP7的作用相反(P均＜0.01).裸鼠移植瘤模型实验发现过表达IGFBP7组的裸鼠种植瘤的体积与质量均小于对照组[(773.50±113.45) mm3比(1 038.75±101.31)mm3,(786±50) mg比(1 145±85) mg,t=7.799、16.280,P均＜0.01].结论 IGFBP7能够影响胃癌细胞的增殖及细胞周期,并影响细胞周期素D1和CDK4的表达,可抑制裸鼠移植瘤的生长.
