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pbmag-1文献资料
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伯氏疟原虫pbmag-1基因片段克隆及原核表达优化
目的 克隆并表达伯氏疟原虫pbmag-1基因cDNA片段.方法 在GenBank中检索伯氏疟原虫编码基因pbmag-1部分cDNA序列,设计特异引物,经RT-PCR从伯氏疟原虫ANKA株扩增出该基因的部分cDNA片段.以锚定Oligo dT引物反转录mRNA获得的cDNA为模板,利用已知序列设计特异引物,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术延伸pbmag-1 3'端未知的编码序列,并将其克隆于原核表达载体后转入大肠埃希菌(E.coli)BL21-(DE3)-RIL株,经优化诱导条件,表达了重组蛋白PbMAg-1并用其免疫小鼠.结果 获得1 341 bp具有完整3'末端序列的pbmag-1基因片段,其A/T含量为73%.以包涵体形式表达的重组蛋白免疫小鼠,其血清抗体经蛋白质印迹(Western blotting)分析,能特异性地识别伯氏疟原虫感染红细胞相对分子质量约为Mr64 000的蛋白.结论 获得重组蛋白PbMAg-1的3'端完整的pbmag-1基因cDNA片段,为研究伯氏疟原虫PbMAg-1蛋白在鼠疟免疫反应中的作用奠定了实验基础.
