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恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒株的出现和消失
目的 1例拉米夫定耐药患者在接受恩替卡韦治疗过程中出现恩替卡韦耐药相关性变异,继续治疗后恩替卡韦耐药株自动消失,并发生HBeAg血清学转换,对该例患者HBV耐药株的动态变化进行了动态观察.方法 收集该患者的系列血清标本及血清HBV DNA、转氨酶等系列临床数据,采用血清HBV DNA的PCR扩增与直接测序,限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,RT序列的克隆与测序等方法,检测HBV耐药株的比例及动态变化.结果 该患者在应用恩替卡韦治疗前就已经存在拉米夫定耐药株(rtL180M+rtM204V),在恩替卡韦治疗后拉米夫定耐药株一度被抑制,随着治疗时间的延长,拉米夫定耐药株的比例又占主导地位.在此基础上,于恩替卡韦治疗第128周,选择出恩替卡韦耐药株(rtL180M+rtM204V+rtT184L),临床上伴随有ALT和HBV DNA水平的反弹.该例患者在发生恩替卡韦耐药后继续接受恩替卡韦治疗,恩替卡韦耐药株自行消失,HBV DNA转阴(套式PCR方法),ALT复常,并出现HBeAg血清学转换.结论 恩替卡韦可有效地治疗拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者,但长期单药治疗可出现恩替卡韦耐药;在出现恩替卡韦耐药后,继续应用恩替卡韦仍然有效,甚至可发生HBeAg血清学转换和HBV DNA的清除.在恩替卡韦治疗过程中,在出现恩替卡韦变异株之前,可能需要先出现拉米夫定耐药株,在此基础上再选择出恩替卡韦耐药株.
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乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药株的全基因组克隆与序列分析
目的:从慢性乙型肝炎恩替卡韦临床耐药的患者血清中,应用高保真聚合酶长距离扩增、克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组序列,建立HBV 恩替卡韦耐药株的全长基因克隆.方法:从3 例恩替卡韦临床耐药的慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,应用高保真聚合酶对3 200 bp 的HBV DNA 进行全序列扩增,通过克隆技术构建PGEM-HBV 重组质粒,DNA 测序后进行序列分析.结果:获得1 株恩替卡韦基因耐药的HBV DNA 全长序列克隆,序列长度为3 216 bp,序列分析发现在逆转录区有L180M、M204V、T184G 位点变异.结论:构建了恩替卡韦基因耐药的HBV DNA 全长序列克隆,为进一步研究HBV 耐药株提供工具.
