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日本血吸虫DNA鸡尾酒疫苗免疫研究
目的 研究日本血吸虫DNA鸡尾酒疫苗的免疫保护效果. 方法 制备日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)、硫氧还蛋白(thioredoxins, Trx)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoriboribosyl-transferase,HGPRT)DNA疫苗,免疫C57BL/6小鼠.C57BE/6小鼠随机分为感染对照组、空质粒对照组、pVAX1-GST免疫组、pVAX1-Trx免疫组、pVAX1-HGPRT免疫组及DNA鸡尾酒疫苗组,依次注射生理盐水,空质粒pVAX1,pVAX1-GST,pVAX1-Trx,pVAX1-HGPRT和由pVAX1-GST、pVAX1-Trx、pVAX1-HGPRT等3种质粒混合而成的DNA鸡尾酒疫苗.每组小鼠于0、2、4周经股四头肌注射免疫,每次间隔2周.末次免疫后2周,每只小鼠经腹部皮肤感染30±1条日本血吸虫尾蚴.感染后42 d剖杀小鼠,并计数各组小鼠血吸虫成虫数和肝虫卵数. 结果 pVAX1-GST、pVAX1-Trx、pVAX1-HGPRT和DNA鸡尾酒疫苗免疫组小鼠的减虫率依次为0、35.78%、47.89%和48.13%,肝减卵率依次为22.94%、34.14%、43.35%和26.77%. 结论 pVAX1-Trx、pVAX1-HGPRT及DNA鸡尾酒疫苗具有一定的抗日本血吸虫病作用,但3种疫苗联合使用并未发现有显著的协同作用.
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荧光蛋白报告载体观察刚地弓形虫SAGl、MIC3、ROP2鸡尾酒DNA疫苗的表达及其免疫原性的研究
目的：构建能同时表达多个基因的刚地弓形虫 DNA 鸡尾酒疫苗并初步观察其免疫原性。方法从基因组 DNA 扩增刚地弓形虫表面抗原（ surface antigen ， SAG ）、微线体蛋白（ microneme ， MIC ）和棒状体蛋白（ rhoptry protein ， ROP ）基因片段，克隆到真核荧光表达载体 pShuttle-CMV-MCS-EF1α-AmCyan ， pLVX-IRES-Zs-green 及pLVX-IRES-rfp 中，构建pShuttle-SAG1， pLVX-Zsgreen-MIC3和 pLVX-rfp-ROP2表达质粒。通过聚乙烯亚胺法用混合质粒转染293F 细胞48 h ，荧光显微镜下观察3个基因的表达情况。将30只 C57BL/6雄性小鼠随机分为A、 B、 C 组，分别肌内注射生理盐水（50μl）、 pShuttle+pLVX-Zsgreen+pLVX-rfp 混合空质粒（2μg/μl，各17μl）、pShuttle-SAG1+pLVX-Zsgreen-MIC3+pLVX-rfp-ROP2混合重组质粒（2μg/μl ，各17μl ）。免疫28 d 后， ELISA 检测血清抗刚地弓形虫 IgG 抗体水平，初步评价该疫苗的免疫原性。结果从刚地弓形虫基因组成功扩增出1、1.1及1.7 kb 的 SAG1、 MIC3和 ROP2序列。成功构建了 pShuttle-SAG1、 pLVX-Zsgreen-MIC3和 pLVX-rfp-ROP2真核荧光表达质粒，转染293F 细胞后观察到相应的蓝、绿、红报告荧光。免疫小鼠后28 d ， ELISA 测得 A、 B、 C 组IgG 抗体的吸光度（A450值）分别为（0.620±0.029）、（0.741±0.040）、（1.561±0.131）， C 组显著高于 A、 B 组（P<0.01）。结论刚地弓形虫 SAG1、 MIC3和 ROP2基因混合重组质粒组成的 DNA 鸡尾酒疫苗能诱导小鼠产生良好的免疫原性，且多个荧光蛋白真核表达载体能够较好地指示目的基因的表达。
