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快速cDNA末端扩增文献资料
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猪-人移植细胞性排斥反应相关候选基因pOSR1的克隆和鉴定
为寻找与异种移植细胞性排斥反应相关的新基因,在抑制消减杂交(SSH)基础上,对一个与人氧化应激反应1(OSR1)基因同源的猪内皮细胞上调表达基因片段CS3作进一步研究.半定量RT-PCR结果证实,在人PBMC作用后,该基因表达的确上调.应用快速cDNA末端扩增(RACE)方法,获得了猪OSR1(pOSR1)的全长cDNA序列.pOSR1 cDNA序列全长4 333个碱基,开读框架长1 590个碱基,编码529个氨基酸.与人OSR1(hOSR1)相比,编码区核酸一致性为92.8%,氨基酸一致性为95,5%.GenBank登录号为AY271356.其功能研究正在进行中.
关键词： 异种移植 排斥反应 内皮细胞 快速cDNA末端扩增 OSR1 -
简并PCR结合RACE技术克隆马尔尼菲青霉未知基因
目的 寻找高效克隆马尔尼菲青霉新基因的方法.方法 从生物信息库中找出已知的酿酒酵母、白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、构巢曲霉SKN7氨基酸保守序列,设计简并引物,PCR扩增获得部分马尔尼菲青霉SKN7 cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其5'端和3'端未知序列.结果 简并PCR扩增可产生多个条带,以预期大小1100bp处条带清晰.5'-RAACE得一约900bp大小产物,无非特异性扩增.3'-RACE扩增产物为多条片段,其中以700bp,400bp和200bp条带相对较清晰,纯化、克隆、测序、比对分析后证实700bp大小产物为目的片段.将上述产物序列进行对位拼接,获得一全长约为2.5kb的序列,它编码的蛋白与其他物种Skn7蛋白高度同源,为马尔尼菲青霉SKN7 cDNA.结论 简并PCR结合RACE技术是一种高效、简单、有效的克隆马尔尼菲青霉新基因的方法.
关键词： 马尔尼菲青霉 简并PCR 快速cDNA末端扩增
