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乙型肝炎表面抗原基因植物高效表达载体的构建
目的:构建果实特异性启动子驱动的含乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)植物表达载体,进一步提高外源目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物防乙肝病毒疫苗打下基础.方法:将番茄果实特异性启动子基因2A12和E8,分别插入到pBPFΩ7构建中间载体pB2A12和pBE8;酶切YEP-HBs载体中的HBsAg小蛋白,并插入到pB2A12和pBE8,得到载体pB2A12-HBs和pBE8-HBs;将其中"p35S+2A12+Ω+HBsAg-s+Tnos"片段和"p35S+E8+Ω+HBsAg-s+Tnos"片段分别亚克隆到pCAMBIA1301,得到植物表达载体pCAM2A12-HBs和pCAME8-HBs.测序鉴定pCAM2A12-HBs、pCAME8-HBs中的启动子和HBsAg片段.后将pCAM2A12-HBs、pCAME8-HBs转化根癌农杆菌EHA105.结果:重组质粒用酶切鉴定均得到预期片段,pCAM2A12-HBs、pCAME8-HBs的测序结果正确.结论:本实验成功构建了番茄果实特异性启动子和CaMV35S组成型启动子共同驱动HBsAg基因的植物表达载体.
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果实特异性启动子驱动的含sbr基因植物高效表达载体的构建
目的构建果实特异性启动子驱动的含编码变形链球菌唾液粘附区( sbr)植物表达载体,进一步提高外源目的基因的表达,为研制有效的转基因植物防龋疫苗打下基础.方法提取番茄基因 DNA,利用 PCR 技术扩增果实特异性启动子 E8和 2A11基因,双酶切质粒 PROP及 PROSC,分别与目的基因连接, 构建重组植物表达载体.结果通过双酶切鉴定,目的基因片段已正确整合到植物表达载体中.结论本实验成功构建了果实特异性启动子驱动的含 sbr基因的植物表达载体.
关键词： 果实特异性启动子 E8 2A11 变形链球菌唾液粘附区 植物表达载体 -
伯氏疟原虫抗原基因高效植物表达载体的构建
目的 构建果实特异启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Rlasmodium berghei merozoite surface protein 4/5)基因的植物表达裁体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础分别以提取的番茄和伯氏疟原虫Anka株的基因组DNA为模板,扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),并通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOE)PCR将二者拼接,拼接后的序列为EM,并合成霍乱毒素B亚基基因CTB,共同构建重组质粒pCAMBIAl302-EM-CTB,电击法转化根癌农杆菌GV3103.结果 重组质粒经酶切鉴定证明已成功转化.结论 实验成功构建了以番茄果实特异启动子驱动PbMSP4/5基因、以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体.
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伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5基因高效植物表达载体的构建
[目的] 构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoite sHrface protein 4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础. [方法] 分别以提取的番茄和伯氏疟原虫的基因组DNA 模板,通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)拼接番茄果实特异表达启动E8的核心序列(约1.11 Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),拼接后的序列为EM.用EcoRI和Hind Ⅲ分别双酶切EM序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重_组质粒pCAMBIA1302-EM用电击法转化根癌农杆菌GV3103. [结果] 重组质粒经PcR及酶切鉴定证明已成功转化.[结论] 本实验成功构建了番茄果实特异性启动子驱动PbMSP4/5基因的植物表达载体.
