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HPLC法同时测定胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素
目的 建立HPLC法同时测定胃复春片(红参、香茶菜、枳壳)中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素成分定量方法.方法 胃复春片甲醇提取物采用kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-水(C),梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长232 nm.结果 蓝萼甲素、蓝萼乙素及蓝萼丁素分别在48.68 ～2 434 ng,32.96 ～1 648 ng,30.56～1 528 ng,范围呈现良好的线性关系,r均为1.000 0；平均加样回收率在98.3％～100.7％之间；蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素的重复性试验RSD均小于2％.结论 本方法可靠稳定,可以很好地用于胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素以及蓝萼丁素的定量测定.
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蓝萼乙素对两种宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制
目的 探讨蓝萼乙素(GLB)对两种宫颈癌细胞株HeLa、SiHa裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制.方法 将HeLa、SiHa细胞分别种植至BALB/C nu裸小鼠右大腿根部背侧皮下,建立裸小鼠移植瘤模型;待移植瘤体积约为0.1 cm3时,于第10天将HeLa组随机分为4组,第14天将SiHa组随机分为4组,分别为生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组,每组5只;经腹腔注射给药,HeLa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.15μmol/g 0.4 mL/只和0.20μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d;SiHa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.18μmol/g 0.4 mL/只和0.24μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d.腹腔注射给药的同时,隔天用标准体重秤称量体质量并做好记录,每隔2d专人用游标卡尺精确测量移植瘤的大长径和短径,至少测量两次取平均值.给药结束后处死裸鼠前,眼球取血,测生化指标和肿瘤标志物,观察各组荷瘤鼠生化指标和肿瘤标志物的变化;通过移植瘤生长抑制试验,组织HE染色,观察各组移植瘤的大体形态、组织形态学的变化;免疫组化法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白PTEN、Beclin 1、LC3的表达变化,Western blot法进一步检验相关蛋白变化.结果 裸鼠处死后,HeLa、SiHa组中生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组生化指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤标志物较生理盐水组、10%乙醇组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);GLB低剂量组和高剂量组的移植瘤体积均明显小于生理盐水组和10%乙醇组,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色显示:GLB低剂量组和高剂量组移植瘤组织出现凋亡、坏死改变;HeLa和SiHa组心肝脾肺肾均未发现转移瘤细胞;免疫组化法、Western-blot法结果示:GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤组织PTEN、Beclin 1及LC3蛋白表达水平较生理盐水组和10%乙醇组明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 GLB对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调PTEN、Beclin 1、LC3的表达,诱导细胞自噬凋亡有关.
