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氟对软骨细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽、跨膜蛋白表达及细胞增殖与凋亡的影响
目的观察氟对软骨细胞印度刺猬蛋白(Ihh)、甲状旁腺激素相关肽(PTHrp)、跨膜蛋白(Smo)表达和细胞增殖与凋亡的影响.方法原代培养乳鼠关节软骨细胞,传第3代后按染氟(氟化钠,NaF)剂量分为0(对照),5、10、20、40 mg/L染氟组.采用噻唑蓝(MTT)法测定24、48、72 h细胞增殖率;流式细胞术法检测24、48、72 h对照组和40 mg/L染氟组细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)和反转录PCR(RT-PCR)法检测48 h Ihh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达.结果与对照组比较,24、48、72 h 5 mg/L染氟组细胞增殖率明显升高,差异有统计学意义[(1.10±0.08)％比(1.17±0.07)％、(1.13±0.08)％比(1.20±0.06)％、(1.15±0.08)％比(1.16±0.08)％];40 mg/L染氟组细胞增殖率在48、72 h显著降低[(0.72±0.11)％、(0.68±0.04)％,P均＜0.05].与对照组比较,40mg/L染氟组软骨细胞凋亡率在24、48、72 h逐渐增高[(1.47±0.05)％、(19.87±3.03)％、(25.30±1.28)％、(45.73±4.63)％,F=123.328,P＜ 0.01].与对照组比较,5、10、20、40 mg/L染氟组在48 h Ihh、PTHrp、Smo蛋白及mRNA表达均明显增高(Ihh蛋白:0.77±0.08比0.98±0.07、1.23±0.06、1.37±0.07、1.34±0.07;PTHrp蛋白:0.68±0.04比0.89±0.05、0.83±0.05、1.29±0.05、1.16±0.08;Smo蛋白:0.37±0.01比0.64±0.06、0.67±0.03、0.96±0.06、0.69±0.06,Ihh mRNA:0.77±0.05比0.98±0.05、1.09±0.05、1.27±0.03、1.46±0.06;PTHrp mRNA:0.67±0.07比0.97±0.05、1.07±0.08、1.37±0.05、1.45±0.05;Smo mRNA:0.45±0.03比0.63±0.04、0.71±0.05、0.81±0.01、1.00±0.02,P均＜0.05).结论低氟剂量对软骨细胞起增殖作用,而高氟剂量则起抑制作用.随时间的延长,氟可促进软骨细胞凋亡;随染氟剂量增高,软骨细胞中Ihh信号通路Ihh 、PTHrp、Smo的蛋白及其mRNA表达逐渐升高.氟上调软骨细胞中Ihh信号通路以及促进软骨细胞的增殖与凋亡,并共同参与软骨细胞的损伤过程.
