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华支睾吸虫铁重链蛋白对人肝星状细胞LX-2的作用
目的 观察重组华支睾吸虫铁重链蛋白(CsFHC)对人肝星状细胞LX-2(简称LX-2细胞)的作用.方法 采用细胞培养方法,体外培养LX-2细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)检测不同浓度CsFHC重组蛋白[0(对照),1、2、5、10、20nmol/L]刺激LX-2细胞48、72h的细胞增殖活性,并通过流式细胞仪分析CsFHC重组蛋白对细胞周期的影响;采用半定量RT-PCR检测LX-2细胞活化相关基因I型胶原(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)和α-平滑肌肌动蛋白(Αsma)Mrna表达情况.结果 对照,1、2、5、10、20 nmol/L CsFHC重组蛋白对LX-2细胞的增殖活性有影响(48h:0.987±0.042、1.315±0.105、1.298±0.078、1.432±0.089、1.781±0.040、1.581±0.056;72h:1.050±0.030、1.503±0.111、1.671±0.102、1.769±0.123、1.927±0.067、1.492±0.081),组间比较差异有统计学意义(F=1892.133、534.136,P均<0.05).当CsFHC重组蛋白为1、2、5、10、20nmol/L时,处于静止期/DNA合成前期(G0/G1)的细胞(74.93±4.05、75.87±4.16、76.73±5.03、78.57±5.51、74.90±3.61)均高于对照组(54.90±3.61,P均<0.05);处于合成期(S)+DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)的细胞(22.24±3.06、24.13±2.00、18.54±1.53、18.71±1.53、21.17±3.06)均低于对照组(33.26±2.65,P均<0.05).对照组,1、2、5、10、20nmol/L CsFHC重组蛋白组Collagen I、Collagen Ⅲ、Αsma Mrna表达水平组间比较差异有统计学意义(48h:F=81.419、14.417、70.456;72h:F=79.224、50.461、41.872,P均<0.05).结论 CsFHC重组蛋白在体外可刺激LX-2细胞的增殖和活化,CsFHC参与华支睾吸虫致肝纤维化过程.
