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乌司他丁对大鼠肢体缺血再灌注急性肺损伤细胞自噬的影响
目的 探讨乌司他丁对大鼠双下肢缺血再灌注导致急性肺损伤肺组织细胞自噬的保护效应.方法 采用LIR模型,72只雄性SD大鼠随机数字表法随机分为假手术+生理盐水组(SO+ NS组),肢体缺血再灌注+生理盐水组(I/R+ NS组),肢体缺血再灌注+乌司他丁组(I/R+ UTI组),每组再分4亚组,即肢体缺血3h再分别灌注0、2、4、8h,每亚组各6只.夹闭股动脉前10 min于大鼠左侧颈内静脉分别注射NS或UTI 5×104U/kg各1 mL,于再灌注各时点末采用免疫荧光法检测肺组织病理变化,利用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测各组肺组织Beclin1和Atg5 mRNA表达及蛋白印迹分析(Western blot)技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达.结果 免疫荧光染色I/R+ NS组不同时点镜下可见肺组织结构紊乱,肺泡间隔增厚甚至实变,而SO+ NS及I/R+ UTI两组上述病理现象减轻;采用2-△△CT法分析肺组织Beclin1和Atg5 mRNA相对表达量I/R+ NS组4、8h时点明显增高(P＜0.01或P＜0.05),与SO+ NS组各相同时点比较均明显增高(P＜0.01或P＜0.05),I/R+ UTI组与I/R+ NS组比较4h时点降低明显(P＜ 0.01);Western blot法检测LC3-Ⅱ蛋白含量及LC3-Ⅱ/GAPDH比值,I/R+ NS组4、8h时点明显增高(P＜0.01),与SO+ NS组各相同时点比较均明显增高(P＜0.01),I/R+ UTI组与I/R+ NS组各相同时点比较明显降低(P＜0.01).结论 乌司他丁可下调大鼠LIR-ALI肺组织细胞自噬的过表达,具有良好的保护作用.
关键词： 肢体缺血再灌注 急性肺损伤(ALI) 乌司他丁 Beclin1 轻链3(LC3)
