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蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定
目的:本研究通过联合两种常用的细胞培养方法,建立了一个蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞原代培养的模型.方法:分离的蜗轴螺旋动脉的平滑肌来自于豚鼠.切碎血管组织并且将其放入37度的0.1%胰蛋白酶溶液中消化20分钟.消化后,将这些消化后的组织块在35-mm的培养皿中贴壁.运用这种培养方法,混杂的成纤维细胞通过与血管平滑肌细胞不同的贴壁能力,可在传代的时候被去除.在7-10天后,细胞从组织块中长出来.大约3周,细胞可长满培养皿.在第三代培养的血管平滑肌细胞中,纯的并且活性好的细胞可以被活得.经过形态学,免疫荧光化学和电镜对这种方法得到的血管平滑肌细胞进行了鉴别.结果:显示了典型的平滑肌的细胞的特点:形态学的"峰-谷"样的生长形态,免疫荧光化学显示这些细胞表达平滑肌细胞的特异性标志物(α-SM-actin和myosin.结论:通过本文研究方法得到的大量的纯的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞是一个很好的研究血管平滑肌细胞在内耳循环紊乱过程生理功能的一个体外模型.除此之外,还可以是一些作用于血管平滑肌药物评价的体外模型.
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耳蜗血管交感及感觉神经双重调节的形态学证据
目的研究酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH) 和钙基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在蜗轴螺旋动脉(spiral modiolar artery, SMA)的定位及共存.方法解剖显微镜下分离豚鼠SMA及其分支.采用TH及CGRP抗体及免疫组织化学ABC法和双标免疫荧光共聚焦定位技术.结果 TH、CGRP阳性的神经纤维分布于SMA的全长及其分支,两者均呈神经纤维网包绕SMA.标记的神经纤维有明显的分支和交叉,含明显的膨体,直径差异较大.纤维的密度随动脉走行逐渐降低.荧光双标共聚焦显微镜观察显示,在豚鼠的SMA,TH、CGRP免疫反应阳性的神经纤维部分共存.结论 CGRP和肾上腺素能神经纤维共同参予对耳蜗血流的调节.
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心钠素在豚鼠耳蜗微血管的分布
目的:观察在豚鼠耳蜗微血管中心钠素(ANP)免疫反应产物的分布,为研究ANP在豚鼠耳蜗微循环中的作用提供形态学基础.方法:采用免疫组织化学ABC法检测ANP在正常豚鼠耳蜗微血管中的分布特征.结果:在耳蜗1～4转的血管纹、蜗轴螺旋动脉主干及底转分支均发现有ANP反应阳性产物;蜗轴螺旋动脉在2～4转的分支为阴性.结论:ANP在内耳微循环的血流量调节方面可能具有重要作用,其分布特点与功能密切相关.
