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基于诱导性多潜能干细胞的亨廷顿舞蹈病发病机制研究
目的:基于诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)多潜能性的特点将亨廷顿舞蹈病(Huntington disease,HD)患者和正常人特异性iPSC定向诱导分化成运动神经元,并在运动神经元的基础上探讨HD的发病机制.方法:将HD患者和正常人的iPS细胞在特定的生长因子和神经因子的作用下定向诱导分化成运动神经元.然后用免疫荧光染色检测运动神经元特异性标记物HB9和ISL1的表达.以DCFH-DA和JC-1为荧光探针,利用流式分析法分别对正常人和HD患者运动神经元细胞活性氧和线粒体膜电位进行检测.结果:经过25天诱导分化成功得到HD患者和正常人的运动神经元,并且免疫荧光染色显示,βⅢ-微管蛋白阳性的神经细胞同时表达运动神经元特异性的标志物HB9和ISL1.此外,经实验统计发现HD患者运动神经元细胞内代表活性氧水平的荧光强度(4704.33±390.50)较正常组(2840.33±166.20)有明显增强(P=0.002),而且代表线粒体膜电位红绿荧光强度比(2.74±0.13)较正常组(3.97±0.29)相比有明显降低(e=0.03).结论:HD患者特异性iPSC能够诱导分化成运动神经元,为实验提供研究模型.HD的发病与运动神经元细胞线粒体功能障碍有关.
关键词： 亨廷顿舞蹈病(HD) iPSC 运动神经元 线粒体功能障碍 -
吗啡对新生鼠海马神经元抑制性突触后电流的作用
目的观察吗啡急性作用于新生鼠海马神经元时,对神经元微小抑制性突触后电流(mIPSC)和自发抑制性突触后电流(sIPSC)的作用. 方法应用全细胞膜片钳技术.结果吗啡急性刺激海马神经元时,使mIPSC和sIPSC的幅度及频率减低,纳洛酮对其有翻转作用. 结论吗啡抑制了突触前膜GABA 随机量子释放,使 mIPSC幅度及频率降低;突触前膜GABA随机量子释放的减少间接影响了由突触前膜自发动作电位诱发的GABA量子释放数目,导致sIPSC频率与幅度降低,从而降低了突触抑制,纳洛酮对其有翻转作用.
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小鼠成纤维细胞诱导为诱导性多能干细胞的研究
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)由于具有无限增殖和多向分化的特性[1],因此在再生医学和药物发现与评价等领域极具应用价值[2].但是ESCs细胞在细胞来源、免疫排斥和法律等方面存在诸多限制.诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)技术的出现使人们从上述争论中解脱出来[3,4],由于iPSC在干细胞标志物表达、表观遗传学以及分化潜能方面与ESCs细胞极其相似,所以iPSC成为细胞治疗以及组织器官再生有前景的种子细胞.笔者采用慢病毒介导的Oct4、Sox2、c - Myc和Klf4基因诱导小鼠尾部成纤维细胞(TIF)为iPSC,成功诱导并鉴定1株iPSC,为组织工程和再生医学提供了种子细胞.
