首页 > 文献资料
-
Ppp5c和TTC16基因的TPR结构域与Hsp70、Hsp90蛋白的相互作用及对细胞周期的影响
目的:研究Ppp5c及TTC16基因的TPR (tetratricopeptide repeat)结构域短片段和Hsp70及Hsp90家族蛋白的相互做用,及其过表达时细胞周期的影响.方法:通过生物信息学的分析及PCR的方法,克隆Ppp5c及TTC16基因的TPR结构域以及HSPAIA、HsP90AA1的全长基因,并连入酵母双杂交载体,通过ClonTech的酵母双杂交实验体系研究蛋白和蛋白之问的相互作用.把Ppp5c及TIC16基因的TPR结构域克隆入真核表达栽体,构架稳定表达Ppp5c及TTC16基因的TPR结构域的MCF-7细胞系,并通过流式细胞实验观察细胞周期.结果:Ppp5c及TTC16基因的TPR结构域能与HSPAIA或HsP90AAI发生相互作用.Ppp5c及TTC16基因的TPR结构域在MCF-7中的过表达能严重影响细胞周期,引起细胞凋亡和S期阻滞.结论:本实验初步揭示了不同蛋白的TPR结构域在与Hsp70及Hsp90蛋白的相互作用性质的异同点以及其过表达对细胞周期的影响,为全面理解TPR结构域的功能、PPP5c以及TTC16蛋白在细胞内的功能奠定了前期实验基础.
-
敲除PPP5C对肝癌细胞生长影响的研究
目的 探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶5(PPP5C)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)进展过程中所发挥的作用.方法 采用实时PCR技术分析人类六个不同HCC细胞系中PPP5C的表达水平,使用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)抑制PPP5C在HCC细胞系HepG2和Bel-7404中的表达,观察PPP5C在HCC细胞的增殖、克隆的形成及周期的进展方面所起到的作用.结果 在慢病毒短发夹PPP5C感染的细胞中,PPP5C的信使RNA水平有显著下降.在PPP5C降低之后,HCC细胞的增殖和克隆形成能力都严重受损.此外,细胞周期分析显示PPP5C降低后,HepC2细胞在G0/G1阶段和G2/M阶段被抑制.结论 PPP5C能够在HCC细胞中表达,而PPPSC的降低能够抑制HCC细胞的增殖、克隆的形成及周期的进展.RNAi导致的PPP5C下降对于HCC的治疗可能是一种潜在的新型治疗策略.
