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脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞的实验研究
目的:探讨通过化学诱导的方法,诱导脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞,为组织工程神经寻找一种新的种子细胞来源.方法:通过酶消化法,分离获得原代脐带间充质干细胞.体外培养至第3代(P3),以1× 103/cm2接种于培养瓶中,待细胞长至亚融合状态,吸弃培养液,加入含β-巯基乙醇的培养液预诱导24h.然后,加入含有全反式维甲酸的培养液进一步诱导72 h.后,加入合有胶质细胞生长因子的培养液,作用两周.对诱导后的脐带间充质干细胞用免疫荧光及RT-PCR法,进行形态观察和表型鉴定.结果:经过上述诱导过程,脐带间充质干细胞的形态,由开始时的扁平、片状、多极,类似成纤维细胞状,逐渐变为长梭形,双极或三极,类似许旺细胞.同时,表达许旺细胞特异性标志S-100、P75;而且S100,P75的mRNA水平也明显上调,并且可以观测到GFAP的mRNA条带.结论:化学诱导法,可以将脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,有望为组织工程神经提供一种新的许旺细胞来源.
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冻干去细胞异种神经和类许旺细胞共移植修复外周神经缺损的实验研究
目的 研究冻干化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只成年雌性DA大鼠分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:冻干化学去细胞异种神经与类许旺细胞共移植组、冻干化学去细胞异种神经移植组、化学去细胞异种神经移植组、异种神经移植组.术后4周、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后24周A组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率优于B、C、D组(P＜0.05);组织学检测发现,术后24周A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主.结论 种植类许旺细胞的冻干化学去细胞异种神经能有效的修复大鼠周围神经缺损.
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冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究
目的 研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 50只成年雌性DA大鼠随机分为5组,每组10只,分别用5种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损.A组:冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组;B组:冻干去细胞异体神经移植组;C组:去细胞异体神经移植组;D组:新鲜异体神经移植组;E组:自体神经移植组.术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果. 结果 术后24周A、E组间差异无统计学意义(P＞0.05),A、E组的各项指标均优于B、C、D组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料.
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类许旺细胞种植入去细胞神经桥接物后体内外标记示踪及神经功能恢复检测
目的将类许旺细胞种植入去细胞神经桥接物内后观察体外培养下细胞存活情况及体内桥接坐骨神经缺损后细胞存活情况及对神经功能恢复的影响.方法通过Dezawa改良法诱导的类许旺细胞经Hochest 33342标记以107/ml显微注入经化学萃取的神经桥接物内,分别体外培养0、5、10、15、20、30 d,苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察细胞在桥接物内的存活情况.同时将该神经桥接物桥接2 cm长的坐骨神经缺损模型,分别于5、10、15、20、30、40 d取材,观察细胞在桥接物内的存活情况、再生轴突的生长速度及再生轴突有髓纤维密度;于第30、50、70 d进行神经电生理检测;于第40、60、80 d进行坐骨神经功能指数测定.同时将无细胞的单纯神经桥接物桥接坐骨神经缺损及自体坐骨神经切断后原位缝合分别作为对照.结果类许旺细胞在体内外条件下均能在化学萃取后的去细胞神经桥接物中存活.体内环境可能更有利于类许旺细胞的增殖.种植类许旺细胞的实验组各测定指标明显优于无细胞桥接对照组(P＜0.05或P＜0.01),实验组与自体神经对照组各指标近似(P＞0.05).结论类许旺细胞种植入去细胞神经桥接物后在体内外环境均能存活;种入类许旺细胞的去细胞神经桥接物桥接神经缺损可达到近似自体神经移植桥接的效果.
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改良法体外诱导骨髓基质干细胞分化为类许旺细胞
目的探讨一种较为有效的诱导方法将骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为类许旺细胞.方法用Dezawa所述方法(称为传统诱导法)加以改良成将所有诱导剂一起联合半量间隔诱导两次的方法(称为改良诱导法),诱导后的细胞从形态学、抗S-100和抗GFAP细胞免疫化学染色的阳性率、MTT细胞活性测定及流式细胞仪检测细胞DNA含量来比较此两种方法对细胞的综合作用.结果改良法诱导的细胞在形态上更具有许旺细胞的长梭形外观,抗S-100及抗-GFAP阳性率分别由58.1%和60.3%提高到79.4%、81.2%(P＜0.05);MTT法细胞活性测定表明改良法对细胞活性影响小(P＜0.01);流式细胞仪DNA含量测定显示S期DNA含量较高(P＜0.05).结论改良法体外诱导骨髓基质干细胞为类许旺细胞具有诱导效果更好,对细胞损害小的优越性.
