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癌基因Src在骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用
目的:探讨癌基因Src在体外培养骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用.方法:构建Src shRNA慢病毒表达载体,在HEK293T细胞中包装慢病毒,感染HT-1080骨肉瘤细胞,经嘌呤霉素加压筛选,获得稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-shSrc;实时定量PCR和Western Blot法检测基因沉默效率;采用原位明胶酶谱法检测侵袭伪足形成;采用侵袭小室实验检测下调Src基因表达对HT-1080细胞侵袭力的影响.结果:成功构建稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-shSrc及对照细胞系HT-1080-shluc,经实时定量PCR和Western Blot检测,与对照细胞系相比,HT-1080-shSrc细胞中Src基因表达下调3倍以上;下调HT-1080细胞中Src基因表达能显著抑制HT-1080细胞侵袭伪足形成及其对细胞外基质的降解能力;下调Src基因表达能显著抑制骨肉瘤细胞侵袭力.结论:癌基因Src参与调节骨肉瘤细胞HT-1080侵袭伪足形成,促进肿瘤侵袭、转移.
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卡铂联合杨梅素对人卵巢癌HO-8910 PM细胞侵袭、转移及MAPK/ERK通路的影响
目的 探究卡铂联合杨梅素对人卵巢癌HO-8910 PM细胞侵袭、转移及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal -regulated protein kinase, ERK)通路的影响.方法 体外培养人卵巢癌HO-8910 PM细胞,以不进行处理的细胞作为正常组,分别用5、20、50 μmol/L卡铂,20、40、60 mg/L杨梅素以及两者联合处理,MTT法筛选联合处理佳浓度,Transwell侵袭实验检测HO-8910 PM细胞侵袭能力变化情况,划痕实验检测细胞转移能力,RT-PCR检测HO-8910 PM细胞伤害性信息与即刻早期基因c-fos、细胞增殖相关基因反式作用因子激活蛋白c-Jun、基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase 9, MMP-9)表达,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK 1/2)、p-ERK 1/2、c-fos、c-jun、活化蛋白转录因子-1(activator protein-1,AP-1)、MMP-9蛋白的表达.结果 卡铂、杨梅素单独处理时,细胞抑制率呈剂量依赖性升高,卡铂20 μmol/L联合杨梅素60 mg/L处理细胞时(联合组),细胞抑制率高为(84.69 ±14.19)%(P＜0.05).与正常组、卡铂20 μmol/L、杨梅素60 mg/L组相比,联合组穿膜细胞数量显著降低,迁移抑制率显著升高( P＜0.05). RT-PCR检测结果显示联合组 c-fos、c-jun、MMP-9 mRNA表达量均显著低于正常组、卡铂20 μmol/L、杨梅素60 mg/L处理组(P＜0.05).联合组p-ERK 1/2、c-fos、c-jun、AP-1、MMP-9蛋白表达量均显著低于正常组、卡铂20 μmol/L、杨梅素60 mg/L处理组( P＜0.05).结论 卡铂联合杨梅素可明显抑制人卵巢癌 HO-8910 PM 细胞侵袭、转移,其机制可能与抑制MAPK/ERK通路有关.
关键词： 卡铂 杨梅素 卵巢癌HO-8910 PM细胞 侵袭、转移 MAPK/ERK
