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JAK2/STAT3信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的作用
目的:探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的表达和作用.方法:采用缩窄门静脉的方法制备门静脉高压大鼠模型,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路.30只SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为单纯手术组、AG490组、假手术组(n=10).AG490组每天给予5 mg/kg体重的AG490,另外两组每天给予相同体积的生理盐水,连续2周后处死大鼠,计算各组脾指数,Masson三色染色检测脾脏组织纤维化程度,免疫组织化学和Western blotting检测脾脏组织中磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白的表达水平.结果:单纯手术组p-STAT3蛋白水平较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05)；单纯手术组脾指数、脾脏纤维化程度较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05)；p-STAT3蛋白水平与脾脏纤维化程度呈明显的正相关趋势(r=0.897,P＜0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路与门静脉高压大鼠脾脏纤维化过程关系密切,阻断该通路可以减轻门静脉高压脾脏纤维化的程度.
关键词： JAK2/STAT3信号通路 脾脏纤维化 门静脉高压 动物模型 大鼠 -
CXC趋化因子配体12及其CXC趋化受体4/7在肝硬化脾亢大鼠脾脏组织中的表达及意义
目的 探讨CXC趋化因子配体12(CXCL12)及其CXC趋化受体4/7(CXCR4/7)在肝硬化脾亢大鼠模型巨脾组织中的表达及意义.方法 将50只雄性SD纯系大鼠,随机分成模型组(n=40)和对照组(n=10).对照组采用0.9％生理盐水灌胃,剂量为0.3 ml/100 g,每周2次,共8周;模型组则采用40％四氯化碳(CCL4)花生油溶液灌胃,剂量0.3ml/100 g,每周2次,共8周.经病理学和血常规检查证实制成肝硬化脾亢模型后,用Masson三色染色观察脾脏组织纤维化程度,用免疫组织化学,Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)三方法检测脾脏组织中趋化轴CXCL12-CXCR4/CXCR7的表达水平,并与对照组进行比较.结果 Masson三色染色显示:肝硬化脾亢大鼠脾脏纤维面积[(11.17±4.85)％]显著高于对照组[(2.83±0.90)％],两组比较差异有统计学意义(t=7.939,P=0.000).模型组脾脏指数[(3.14±0.98) mg/g]高于对照组[(2.33 ±1.03) mg/g],两者比较差异有统计学意义(=2.351,P =0.025).免疫组织化学检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7的平均吸光度值分别为(8.89 ±4.89)×10-3、(8.78±4.67)×101、(8.47 ±3.97) ×10-3,显著高于对照组(2.89±1.11) ×10-3、(2.03±0.45)×10-3、(1.81±0.69) ×10-3,差异有统计学意义(=4.126,P=0.001;t=4.973,P=0.000;t =5.644,P=0.000);模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7阳性细胞率分别为(31.02±9.03)％、(33.22±8.31)％、(28.89±8.40)％,显著高于对照组(20.62±8.88)％、(18.81±6.23)％、(10.49±2.99)％,差异有统计学意义(t=3.112,P=0.004;t=4.170,P=0.001;t=6.293,P=0.000).Western blot检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7蛋白相对表达量分别为1.71±0.98、1.01±0.57、1.15±0.77,显著高于对照组0.39±0.13、0.32±0.11、0.51±0.31,差异有统计学意义(t=6.366,P=0.000;t=5.550,PD =0.000;t=3.348,P=0.002).RT-qPCR检测:模型组CXCL12、CXCR4及CXCR7 mRNA相对表达量分别为3.48±0.90、1.99±0.34、2.53±0.59,显著高于对照组1.05 ±0.10、1.00±0.18、1.02±0.02,差异有统计学意义(t=9.607,P=0.000;t 10.460,P=0.000;t9.259,P=0.000).Pearson 相关分析显示:,CXCL12蛋白相对表达量(1.31±1.02)、CXCR4的蛋白相对表达量(0.80±0.57)、CXCR7的蛋白相对表达量(0.96±0.72)与脾脏纤维面积(8.65±5.62)％呈正相关(r=0.688,P=0.001;r =0.711,P=0.001;r=0.579,P=0.009).CXCL12 mRNA相对表达量(2.74±1.37)、CXCR4 mRNA相对表达量(1.69±0.55)、CXCR7 mRNA相对表达量(2.07±0.87)、与脾脏纤维面积(8.65±5.62)％呈正相关(r=0.694,P=0.001;r =0.647,P=0.003;r =0.609,P=0.006).结论 CCL4致肝硬化脾亢大鼠巨脾中CXCL12-CXCR4/CXCR7的表达异常增高,且与脾脏纤维面积呈正相关,可能参与了肝硬化脾亢大鼠脾脏纤维化的过程.
