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毕赤酵母茵文献资料
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毕赤酵母菌高效表达乙肝表面抗原的研究
目的:筛选高效表达HBsAg的毕赤酵母茵,制备目的蛋白.方法:从已确诊的乙肝病人血清中提取DNA,PCR扩增HBVS基因,将其分别克隆入毕赤酵母胞内表达栽体pPICZA中.构建重组质粒pPICZA-S和pPICZA-SH,经Sac I线性化后,LiCI化学法转化入酵母茵株GS115、X-33、KM71H和SMD1168.结果:诱导表达后的GS115工程茼单位体积的培养基所得的抗原含量高,诱导培养基中加入0.1%酪蛋氨基酸后,可抑制目的蛋白的水解,有利于目的蛋白的表达,粗略估算表达量为15.3mg/L,佳收获时间为72 h.结论:经SDS-PAGE和Westcrn-blot分析表明,所得产物为乙肝表面抗原S蛋白.
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结核分枝杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中的构建及其表达
目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6基因.方法 以重组质粒pET23a-ESAT-6为模板,亚克隆目的片段ESAT-6至酵母菌分泌表达载体pPICZaA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母茵GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法分析.结果 成功构建了pPICZaA-ESAT-6毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为18kDa的蛋白.蛋白质印迹(Western blot)显示,18kDa蛋白被活动性肺结核病人血清抗体识别.结论 在毕赤酵母茵中成功表达了带有信号肽ESAT-6基因,为进一步研究新型单位疫苗打下坚实的基础.
