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探针杂交法文献资料
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QPCR法与DNA探针杂交法检测重组人生长激素原液中残余DNA的比较
目的 对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)原液中残余DNA检测的实时荧光定量PCR(以下简称QPCR)法和DNA探针杂交法进行对比.方法 提取3批rhGH原液中残余DNA,经SYBR GREEN Ⅰ荧光染料法对残余DNA进行QPCR检测,对建立的方法进行准确度、精密度及引物特异性验证,并与《中国药典》三部(2015版)中规定的DNA探针杂交法检测的残余DNA含量进行比较.结果 QPCR法对3批rhGH原液残余DNA含量均可定量,灵敏度可达7.5fg.标准品DNA浓度在7.5fg/μL ～ 750 pg/μL范围内线性关系良好,R2为0.998,加标回收率为78.40％～ 106.45％.两种方法检测的3批rhGH原液残余DNA含量均小于《中国药典》三部(2015版)中规定的10 ng/剂量的要求.结论 QPCR法高效快捷,通过DNA与染料结合可实时监控PCR过程中的每一步反应,减小污染,对样品中残余DNA可进行准确定量,比DNA探针杂交法更适用于样品中残余DNA含量的检测.
