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RAS鸟苷酸释放因子2文献资料
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稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立
目的 构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株.方法 用Sgf Ⅰ和Not Ⅰ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位.经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达.结果 经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中；重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达；经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达.结论 成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础.
关键词： RAS鸟苷酸释放因子2 真核细胞 基因表达 肺肿瘤
