首页 > 文献资料
-
人Bid蛋白的原核表达及纯化
目的 克隆人Bid基因,原核表达并纯化目的 蛋白.方法 用PCR方法 从HeLa细胞cDNA文库中扩增人Bid基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达.表达产物经GST亲和层析纯化.结果 PCR扩增得到588 bp的DNA片段.重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid经双酶切鉴定和测序表明构建正确.表达的目的 蛋白相对分子质量约48 000,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度可达97%.结论 已成功克隆并原核表达了人Bid基因,得到纯度较高的Bid蛋白.为进一步研究其结构和功能奠定了基础.
-
地塞米松对脑缺氧缺血大鼠bid基因表达及细胞凋亡的影响
目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后bid基因表达及细胞凋亡的变化,地塞米松(DEX)对其的调控作用,从而阐明DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制.方法 7 d龄sD大鼠24只.随机分成DEX组、9g/L盐水组(NS组)、HIBD组、健康对照组.DEX和NS组在缺血缺氧前12 h腹腔内分别注射DEX、等量NS.通过建立新生大鼠HIBD动物模型,取实验侧大脑半球,采用RT-PCRF技术检测脑bid基因表达,采用Tunel法检测凋亡细胞.结果 正常组无bid基因表达,HIBD组bid基因表达明显上调,凋亡细胞数明显增加(P＜0.01);与HlBD组比较,DEX组bid基因表达明显下调,而凋亡细胞数明显减少(P＜0.01).结论 脑缺氧缺血引起神经细胞凋亡可能与bid基因表达明显上调有关.DEX能通过下调bid基因表达,从而抑制细胞凋亡,起到神经保护作用.
-
Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的动态变化
目的探讨Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的动态变化.方法通过建立新生大鼠HIBD动物模型,采用RT-PCR技术检测缺氧缺血后不同时间点缺血侧脑组织中Bid基因表达的变化.结果正常组中无Bid基因表达,缺氧缺血组Bid基因表达明显上调,且随着缺氧缺血后时间的延长,Bid基因表达呈动态变化缺氧缺血后6 h其表达开始增加,24 h达高峰,48～72 h有所回落.结论脑缺氧缺血引起的神经细胞凋亡可能与Bid基因表达上调有关.
-
截短型人bid基因的克隆、表达和促凋亡作用的研究
目的:探讨截短型 bid(truncated bid, tbid)基因的表达对Hela细胞的促进凋亡活性.方法:用RT-PCR法克隆人全长bid基因, 测序正确后, 通过PCR截去编码N末端60个氨基酸残基的基因, 而获得tbid基因.将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-EGFP中, 用脂质体法转染Hela细胞.通过荧光显微镜、电子显微镜观察和TUNEL检测法, 检测目的基因的表达对转染细胞的形态及生长状况的影响.结果:成功地构建了tbid基因的真核表达载体.以其转染Hela细胞后, tbid基因在细胞中得到表达, 随后引起细胞荧光强度下降, 生长状况不良甚至死亡.电镜观察及TUNEL检测的结果显示, 许多细胞呈典型的凋亡特征. 结论:tbid基因的表达可促进Hela细胞的凋亡.
