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人白细胞介素-18突变体的虚拟筛选及其活性
目的 筛选合适的人白细胞介素-18(hlL-18)突变体,并检测其活性.方法 运用分子模建工具,模建出IL-18受体及IL-18/IL-18R复合物的分子结构,分别虚拟突变IL-18的4个半胱氨酸为另外19种氨基酸,以野生型IL-18为模板进行同源模建,建立其三维结构模型,计算其IL-18/IL-18R复合物三维结构及分子间作用能变化情况,筛选几种突变方案.运用分子生物学技术构建突变体,表达纯化后进行活性检测.结果 根据理论预测情况,筛选了12株突变体.突变的质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.突变体蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度大于90%.纯化的C38Glu、C127Ser等几株突变体在低浓度时,活性轻微上升,与理论预测结果基本相同.结论 已成功构建了多株IL-18的突变体,运用生物信息学方法进行先期筛选有助于加快IL-18的突变研究.
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人白细胞介素-18的基因克隆及原核表达
目的为进一步研究人白细胞介素(hIL-18)的生物学特性打下基础,进行hIL-18的基因克隆及原核表达.方法采用反转录PCR(RT-PCR)法从正常人外周血白细胞中克隆hIL-18基因,并重组于PBV220表达载体上,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析,继而观察重组hIL-18基因在大肠杆菌中不同诱导时间表达量的差异.结果所克隆的基因与预期结果一致,并在42℃诱导5h时表达量高.结论成功地克隆了hIL-18基因,并使获得高效表达.
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人白细胞介素-18真核表达载体的构建及测序分析
目的:构建含有人白细胞介素-18(IL-18)基因的真核表达载体,并对其进行测序分析. 方法:通过分子克隆技术,将IL-18基因插入真核表达载体pVAX1中,构建真核表达载体pVAX1-IL-18,并经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切及测序鉴定.利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中与重组质粒(pVAX1-IL-18)中编码IL-18基因同源的序列.结果:人IL-18基因成功地克隆至真核表达载体pVAX1中,pVAX1-IL-18 中编码IL-18的序列与GenBank中所报道的IL-18编码序列完全一致. 结论:成功地构建人IL-18基因真核表达载体,为其作为核酸疫苗的细胞因子佐剂奠定了基础.
