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日本七鳃鳗Lj-RGD3缺失突变体Lj-113人工合成序列的基因克隆与蛋白表达
目的 获得突变体Lj-113的基因重组蛋白,为其与野生型活性比较打下物质基础.方法 对日本七鳃鳗RGD缺失突变体Lj-113进行基因全序列人工合成,并以Nde I与Hind III为酶切位点构建于pET23b载体上,获得阳性基因重组质粒pET23b-Lj113.CaCl2法将重组质粒转化入大肠杆菌BL21表达菌中,对其进行终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,并对表达蛋白进行组氨酸亲和层析纯化蛋白.结果 成功获得七鳃鳗RGD缺失突变体的基因重组蛋白的可溶性表达.结论 人工合成基因序列可通过分子克隆方法获得其蛋白的表达.
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重组日本七鳃鳗毒素蛋白 rLj-RGD3对凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡的保护作用
目的：研究rLj-RGD3对凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡的保护作用,并比较等效剂量的肝素与rLj-RGD3的出血倾向。方法以尾静脉注射凝血酶2500 IU/kg攻击造成小鼠肺栓塞死亡,计算小鼠肺栓塞死亡比率和保护百分率以评价rLj-RGD3对抗凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡的保护作用；小鼠给予等效(对凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡的保护作用)剂量的肝素及rLj-RGD3后,测定尾出血时间( BT)。结果 rLj-RGD3呈剂量依赖性降低凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡比率而升高保护百分率。等效剂量的rLj-RGD3及肝素BT 延长%分别为78.1%和323.8%,rLj-RGD3是肝素的24.1%。结论 rLj-RGD3具有保护凝血酶诱发小鼠肺栓塞死亡作用,且出血倾向小。
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重组日本七鳃鳗毒素蛋白rLj-RGD3及其4种突变体抗血小板聚集活性的比较
目的：初步探讨rLj-RGD3分子中3个RGD模体对野生型rLj-RGD3抗血小板聚集活性的作用。方法全序列人工合成并重组表达、纯化4种rLj-RGD3缺失突变体蛋白。制备富血小板血浆( PRP)，与不同浓度各重组突变体蛋白共温浴，采用Born氏比浊法测定ADP诱导的血小板聚集率，并计算血小板聚集抑制百分率，以评价野生型rLj-RGD3及其4种突变体蛋白的抗血小板聚集活性。结果成功重组表达纯化4种可溶性rLj-RGD3缺失突变体蛋白， rLj-RGD3抗血小板聚集活性高， rLj-RGD3-0不具有抗血小板聚集功能， rLj-RGD3-1、rLj-RGD3-2及rLj-RGD3-3活性相当。结论3个RGD模体在rLj-RGD3抗血小板聚集功能中均十分重要，并不分伯仲，而rLj-RGD3因分子中含有3个RGD模体而活性强。
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新的适应性免疫系统——可变淋巴受体研究进展
七鳃鳗是一种古老的脊椎动物,是脊椎动物进化的祖先.近年来,在其体内发现了一种新的适应性免疫形式受体——可变淋巴受体(Variable lymphocyte receptor,VLR).它类似于有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,是无颌类脊椎动物中重要的免疫受体分子.与免疫球蛋白型抗原受体相似,它不仅可以形成多种多样的VLR来识别大量抗原,还具有与T/B淋巴细胞受体相似的功能.这种特殊受体的发现,对揭示免疫系统的起源与进化具有重要意义.研究表明,这种新型的可变淋巴受体具有其特殊的形成机制、结构和功能特性,现阶段通过大量的研究已经对其形成机制、结构和功能有了更进一步的了解,并证明了VLR与T/B淋巴细胞受体具有一定的相似性.本文就近年来对可变淋巴受体的研究进展进行概述,为进一步深入研究适应性免疫系统的起源与进化提供相关资料.
