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嵌合体核酶文献资料
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以U1小核核糖核酸为靶向基因构建 HCV特异性嵌合体核酶
目的:以人类U1小核核糖核酸为载体,构建特异性嵌合体核酶,以期用于HCV感染的基因治疗.方法:将HCV特异性核酶序列设计为引物序列一部分,以人类U1小核核糖核酸为模板,经PCR法及2次克隆得到嵌合体,使核酶序列替代U1结构中第3个茎-环.结果:经测序证实新建质粒中确实有核酶序列且替代了第3个茎-环.结论:以U1小核核糖核酸为靶向基因可以构建出HCV特异的U1嵌合体核酶.
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HCV特异性U1小核核糖核酸嵌合体核酶的构建
一、材料与方法1. 以包含有野生型人类U1小核核糖核酸基因序列的质粒pBSIISK+(2.96kb)为模板进行PCR反应:引物1:5′-ACT CCG GAT GTG CTG ACC CCT GCG A TTG GTG TCTGA TGA GTC CGT GAG GAC GAA ACG TTT GGG AC TGC ATAA TTT GTGG-3′(81mer);引物2:5′-TCT AGA GGA TCC GGTT AGCG-3′(20mer).引物1起始于模板的+70位,其5′端包含了限制性内切酶Kpn2Ⅰ的切割位点,其中划线部分的37个碱基为核酶序列(包括侧翼和核心部分),其上下游序列分别与模板链的+70～+94及+117～+133位互补;引物2与模板另一条链的+193～+213位互补,其5′端包含了限制性内切酶XbaⅠ的酶切位点.经PCR反应扩增片段长为159bp.
