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成纤维细胞生长因子1/分析文献资料
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人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达
目的:探讨人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人aFGF的生物学活性.方法:①通过PCR法扩增人aFGF引入点突变,对其密码子进行改造;②构建aFGF-pET-28a重组质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;③重组蛋白的纯化及生物学活性研究.结果:通过PCR扩增,将设计的核酸水平突变引入到aFGF DNA中,使其自起始密码ATG后的前50个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变,成功地实现了重组人aFGF在大肠杆菌中的高效表达,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加,原核表达的aFGF亦具有天然生物学活性,结论:通过对aFGF DNA碱基进行改造,可大幅度提高aFGF在大肠杆菌中的表达量,且目的蛋白具有良好的生物学活性.
关键词： 成纤维细胞生长因子1/分析 大肠杆菌 重组 遗传 聚合酶链反应
