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环磷腺苷效应元件结合蛋白磷酸化在胰岛素样生长因子-1抑制耳蜗毛细胞凋亡中的作用
目的:探讨磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(P-CREB)对胰岛素样生长因子(IGF)-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用。方法体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。实验分为A组:正常对照培养液;B组:庆大霉素(GM)(0.5 mmol/L);C 组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(1 ng/ml);D组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(10 ng/ml);E组GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(50 ng/ml);F组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(100 ng/ml)。培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用 Western 印迹及 RT-PCR 法观察 P-CREB 的表达情况。结果 A 组无凋亡细胞。B组检测到凋亡细胞。 C组细胞凋亡较B组明显减少。 D组凋亡细胞减少明显(与 B组相比,P<0.05)。 E组及 F组凋亡细胞较 D组有所增加。P-CREB:Western印迹结果及RT-PCR结果表明:A组及B组P-CREB蛋白及mRNA表达较低。与B组相比,C、D、E及F组P-CREB蛋白及mRNA明显增加,以D组增加明显。结论 IGF可能通过激活CREB磷酸化抑制毛细胞凋亡。