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糖皮质激素调节蛋白激酶3文献资料
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蛋白激酶SGK3基因的克隆及其在乳腺癌细胞中的表达
目的：探讨通过克隆蛋白激酶（SGK）3基因并将其转染乳腺癌MCF－7细胞建立高表达SGK3的MCF－7细胞系的稳态性。方法利用真核表达载体N－端增强型绿色荧光蛋白（pEGFP－N1）通过基因克隆技术构建重组质粒，通过菌落PCR和DNA测序方法对重组质粒进行鉴定。通过PEI介导将重组质粒pEGFP－N1－SGK3转染至乳腺癌MCF－7细胞中，荧光显微镜和 Western印迹方法对基因转染效率以及融合蛋白 GFP－SGK3的表达进行鉴定。结果成功构建了真核表达质粒，将其命名为pEGFP－N1－SGK3；在荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光，表明获得了较高的转染效率；Western印迹结果显示，在转染pEGFP－N1－SGK3的细胞中可见阳性条带，而MCF－7亲本细胞和转染空载体的对照组细胞无阳性条带。结论成功构建了重组质粒pEGFP－N1－SGK3，获得了稳定表达融合蛋白GFP－SGK3的MCF－7细胞系，可用于后续SGK3细胞内功能的研究。
关键词： 糖皮质激素调节蛋白激酶3 基因克隆 乳腺癌
