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骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究
目的:观察骨髓间充质干细胞分离、鉴定方法及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制.方法:取大鼠31只,1只大鼠采用贴壁培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞形态,Real-time PCR检测培养细胞表面分子量.30只大鼠采用链脲佐菌素腹腔注射构建糖尿病大鼠模型.根据处理方法不同分为对照组(n=15)和干细胞治疗组(n=15).对照组大鼠采用胰岛素联合普罗布考治疗,干细胞治疗组植入干细胞治疗,治疗前、后检测2组大鼠空腹血糖、24 h尿蛋白排泄、肌酐清除率、肾重比体重;采用PAS染色观察2组肾组织情况;采用Western blot检测肾脏组织相关基因和蛋白水平.结果:原代骨髓间充质干细胞培养24 h后换液时可见细胞分布不均匀,在培养瓶呈分片聚集,形态不规则.培养7 d后细胞集落多,细胞规则,呈长梭形、椭圆形,折光性强,细胞间相互融合铺满瓶底;骨髓间充质干细胞传代培养后细胞形态均一,呈长梭形,轮廓清除,折光性强,生长迅速,部分细胞呈漩涡状;Real-time PCR检测结果显示:SH2、CD44、CD31呈阳性表达,CD34呈阴性表达;观察组治疗后空腹血糖、24 h尿蛋白排泄、肌酐清除率、肾重比体重,显著低于对照组(P<0.05);干细胞治疗组大鼠肾脏组织PAS染色结果显示:肾小球结构清晰,形态规则,肾小球内细胞排列规则,基底膜和包曼氏囊清晰.对照组大鼠肾小球体积增大,系膜区增宽,基质明显增多;干细胞治疗组治疗后Bcl-2蛋白水平得到显著提高,Bax和Caspase-3蛋白水平得到显著下降.对照组Bcl-2蛋白水平得到显著降低,Bax和Caspase-3蛋白水平得到提高(P<0.05).2组治疗前氧化应激ROS、MDA、SOD指标差异无统计学意义(P>0.05);干细胞治疗组治疗后氧化应激ROS、MDA、SOD指标,低于对照组(P<0.05).结论:利用贴壁培养法能分离大鼠骨髓间充质干细胞并利用绿色荧光蛋白进行体外标记,植入骨髓间充质干细胞能保护机体肾脏,抑制糖尿病肾脏的氧化应激反应.
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两种不同方法检测乙肝病毒感染的临床效果比较
分析Real-timePCR法和ELISA法在乙肝病毒感染检测中效果。选取收集的290份乙肝患者血清，采用Real-timePCR法和ELISA法分别进行检测，比较两种检测方法的结果差异。 Real-timePCR法检测乙肝病毒感染阳性率为98．62%，ELISA为93．10%，Real-timePCR法检测阳性率显著高于ELISA法（P<0．05)。Real-timePCR法检测乙肝病毒感染的阳性率明显较ELISA法更高，具有定量检测乙型肝炎病毒感染情况的优势，值得临床推广应用。
关键词： Real-timePCR法 ELISA法 乙肝病毒
