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重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8+ T细胞表位的运送研究
目的:分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8+ T细胞表位的效应.方法:将携带融合表达绿色荧光蛋白(GFP)与OVA CD8+ T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A(pG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应.同时,重组菌13A(pG2F)以静脉注射方式免疫C57BL/6小鼠,应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞.结果:感染试验表明,大肠杆菌13A能向APC中运送真核表达质粒,并且外源GFP基因获得了表达.体外抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2小时),LKb和BMDC均可提呈重组菌13A(pG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48小时),LKb细胞对CD8+ T细胞表位的提呈效应增强.在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb细胞.体内结果显示,大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答.结论:重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴.
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重组减毒细菌运送CD8+T细胞表位的效应分析
目的: 分析重组减毒菌体外运送CD8+ T细胞表位的效应.方法: 以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV) CD8+ T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、 25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、 LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC), 应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应.结果: 感染试验证实, 减毒菌13A、 25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力, BMDC对重组菌具有很好的摄取功能.抗原提呈试验结果显示, 在感染的早期(2 h), LKb、 LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位; 在感染的晚期(48 h), LKb细胞对OVA257-264 CD8+ T细胞表位的提呈效应降低, LLd细胞对LCMV 118-132 CD8+ T细胞表位的提呈效应增强.3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位.另外, 在同样的作用条件下, BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞.结论: 重组菌能运送CD8+ T细胞表位, 为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴.
