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TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MAPKs通路的活化
目的:研究INF-α在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocyte,FLS)信号转导中MAPKs激活情况.方法:原代培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞;应用Western blot检测TNF-α短时间内引起RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态变化,及其对MAPKs家族成员活化的浓度效应和时相特点.结果:INF-α可以瞬时引起RA FLS 蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加;并在短时间内激活MAPKs通路(ERK2、JNK2、P38为主),不同浓度梯度TNF-α作用显示:10 U/ml时对ERK2、JNK2即可达到峰值活化,100 U/ml时P38达到大活化.时间上,ERK2、JNK2、P38的活化分别在TNF-α作用后5 min、15 min、15 min明显.结论:INF-α在RA FLS 信号转导中,可以瞬时导致蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加,并同时激活MAPKs 3条通路,但是MAPKs 3个亚家族成员的活化具有异质性.
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诱导内皮细胞E-选择素表达方法的建立及标准化
目的应用肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)这一典型的炎症介质,寻找使人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表面表达E-选择素(E-selectin)达峰值时所需TNF-alpha的佳浓度与佳作用时间,制备炎症模型.方法体外培养HUVEC,经TNF-α刺激后,采用间接流式细胞术进行细胞表面E-selectin的检测.结果脐静脉内皮细胞经TNF-alpha 5 ng/ml刺激后3-6小时,E-selectin表达至峰值.结论 TNF-α刺激时间及用量的定量化,检测方法标准化,为进一步的炎症实验提供了必要的基础.
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小鼠STM多种感染模型中肿瘤坏死因子-alpha的肠道及肠外器官表达
目的 研究小鼠在菌群失调或免疫抑制状态下,感染STM时,TNF-alpha在肠道和肠外器官的表达情况.方法 分别用氢化可的松腹腔注射小鼠后再接种STM,用链霉素灌胃后接种STM,用STM直接灌胃小鼠,以及用生理盐水灌胃小鼠,然后使用免疫组织化学和图像分析半定量测定各自肠道和肠外器官的TNF-alpha各时点表达情况,统计分析各组TNF-alpha表达差异.结果 接种了STM的各组小鼠的小肠、回盲部及其他脏器TNF-alpha表达阳性,对照组未出现上述变化.TNF-alpha表达阳性的3组小鼠随时间变化的小肠、回盲部TNF-alpha表达曲线趋势有差异,经单变量多因素方差分析统计检验,P＜0.05.结论 使用糖皮质激素所造成的免疫抑制后用STM感染小鼠,能抑制肠道TNF-alpha的表达;而使用抗生素后用STM感染小鼠,能增强肠道TNF-alpha的表达.
