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外源性脑源性神经营养因子通过抑制tau蛋白磷酸化减少细胞凋亡
目的 观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对tau蛋白过磷酸化及神经元凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)分为正常对照组；冈田酸(OA)组:浓度为40 nmo/L的OA处理24 h；BDNF组:OA处理24 h后加入浓度为50 ng/mL的BDNF处理15 min;LY294002组:OA处理24 h后加入BDNF(50 ng/mL)及LY294002(40 nmol/L)共同处理15 min；K252a组:OA处理24 h后加入BDNF(50 ng/mL)及K252a (40 nmol/L)共同处理15 min.通过MTT检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测Ser199/202、pSer199/202及bcl-2表达.结果 MTT 实验显示OA组、LY294002组及K252a组细胞存活率较正常对照组及BDNF组明显减低(P＜0.01)；BDNF组与正常对照组无明显差异(P＞0.05).流式细胞仪检测显示OA组、LY294002组及K252a组细胞凋亡率较正常对照组及BDNF组明显增加(P＜0.01)；BDNF组与正常对照组之间无统计学差异(P＞0.05).Western blot显示OA组、LY294002组及K252a组pSer199/202表达较正常对照组及BDNF组明显增多(P＜0.01),Ser199/202及bcl-2表达较对照组及BDNF组明显减少(P＜0.01),BDNF组与正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05).结论 外源性BDNF可通过抑制tau蛋白磷酸化减少细胞凋亡.
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淀粉样前体蛋白转基因鼠神经干细胞分化中细胞凋亡及Tau蛋白磷酸化检测
目的:比较淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠与同遗传背景的正常鼠的神经干细胞在分化过程中细胞凋亡、Tau蛋白变化及Tau[pS396]磷酸化的情况.方法:剪取新生的APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,用PCR法检测动物是否携带有APP基因;而后分别取APP+鼠和正常鼠海马部位脑组织,按常规进行神经干细胞(NSC)的培养,并将纯化的NSC进行诱导分化,根据细胞来源不同分为APP+细胞组和正常细胞组,用线粒体膜电位法检测APP+细胞组、正常细胞组的细胞凋亡情况,用免疫荧光化学和免疫蛋白印记法测定2组细胞总Tau蛋白水平及Tau[pS396]磷酸化的变化.结果:APP+组细胞凋亡率明显高于APP-细胞(P<0.05).APP+细胞中总Tau蛋白和Tau[pS396]的磷酸化水平明显高于APP-细胞组(P<0.05).结论:APP+转基冈鼠神经干细胞分化中细胞凋亡率明显增加,细胞内Tau蛋白和Tau蛋白磷酸化水平增高.
