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神经干细胞分化过程中Eph/ephrin A3的表达及意义
目的 探讨海马源性神经干细胞在分化过程中Eph/ephrin A3通路的表达及其意义.方法 神经干细胞提取自新生大鼠的海马区,经分离培养及鉴定,用免疫组化方法检测在神经干细胞分化过程中促红细胞生成素肝细胞受体A3(Eph A3)及其配体ephrin A3的表达情况.结果 Eph A3表达于神经干细胞的胞质,随着神经干细胞的分化,Eph A3在胞质中的表达稍有减弱;ephrin A3逐渐在分化细胞的胞质和胞膜中出现并且表达增强.结论在神经干细胞的增殖及分化期存在Eph/ephrin A3通路的表达,二者的跨膜信号传导在神经细胞突起的生长中发挥着一定作用.
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EphA3通过调控VEGF参与肝癌细胞侵袭的机制
目的 探讨促红细胞生成素肝细胞受体A3 (EphA3)参与肝癌细胞侵袭的作用机制.方法 培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株HepG2和MHCC97H.采用siRNA干扰的方法抑制肝癌细胞中EphA3的表达.设立未处理组(未处理肝癌细胞),对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA3).用RT-PCR和Western blot法检测EphA3的表达;用Transwell小室检测不同处理后的HepG2和MHCC97H细胞的侵袭能力;采用Western blot和ELISA法检测VEGF蛋白表达和活力的变化情况.多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验.结果 HL-7702、HepG2和MHCC97H中EphA3 mRNA的相对表达量分别为0.94±0.13、1.76 ±0.16和3.62±0.14; EphA3蛋白的相对表达量分另别为0.96 ±0.12、1.59 ±0.11和3.82 ±0.11,非肿瘤细胞与肝癌细胞中EphA3表达比较,差异有统计学意义(t=2.511,6.437;2.321,6.895,P＜0.05).RT-PCR法检测HepG2细胞系中未处理组、对照组、siRNA干扰组EphA3 mRNA的相对表达量分别为0.95 ±0.11、0.96 ±0.12和0.31±0.15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=4.051,P＜0.05);MHCC97H细胞中EphA3 mRNA的相对表达量分另别为0.97±0.16、0.95 ±0.14和0.40 ±0.11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=5.237,P＜0.05);Western blot法检测3组HepG2细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0.97 ±0.16、0.95 ±0.15和0.32±0.17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(=4.145,P＜0.05);MHCC97H细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0.95 ±0.11、0.96±0.12和0.38±0.17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =4.327,P＜0.05).采用体外侵袭实验,检测3组穿透的细胞数量,HepG2细胞系细胞数量分别为(111±4)个/10HPF、(109±5)个/10HPF和(51±3)个/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =7.582,P＜0.05);MHCC97H细胞系细胞数量分别为(402 ±6)个/10HPF、(397 ±7)个/10HPF和(152 ±7)个/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=9.479,P＜0.05).Western blot 法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0.98 ±0.11、0.96 ±0.13和0.57 ±0.11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.167,P＜0.05);Western blot法检测MHCC97H细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0.97 ±0.14、0.98 ±0.12和0.34±0.15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t =4.278,P＜0.05).ELISA法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0.96±0.15、0.94 ±0.11和0.47 ±0.13,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.981,P＜0.05);MHCC97H细胞中VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0.98±0.12、0.97 ±0.12和0.38±0.14,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=4.059,P＜0.05).结论 EphA3可能是通过调控VEGF蛋白表达和活性来实现肝癌细胞的侵袭,提示EphA3可作为肝癌治疗的新靶点.
关键词： 肝肿瘤 促红细胞生成素肝细胞受体A3 血管内皮生长因子 侵袭
