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E2F1基因在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达及意义
目的 通过检测E2F1基因在高氧致早产儿慢性肺疾病(CLD)新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达,初步探讨E2F1基因在CLD肺间质纤维化发生发展过程中的生物学作用.方法 足月新生SD大鼠于生后12 h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14、21 d随机处死动物后,无菌条件下采集肺组织,进行肺成纤维细胞的原代培养,免疫组化、Western blot法检测E2F1蛋白表达,real-time PCR法检测E2F1 mRNA含量.结果 生后3 d空气组和高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达(蛋白:0.251±0.054,0.249±0.074;mRNA:0.066 4±0.003 4,0.066 8±0.003 7)无统计学差异(P>0.05);生后7 d时高氧组E2F1蛋白及mRNA的表达较空气组增加(蛋白:0.248±0.041,0.278±0.034;mRNA:0.065 9±0.003 1,0.072 8±0.004 7),差异有统计学意义(P<0.05);14 d、21 d时增加明显(蛋白:0.243±0.077 vs 0.328±0.057,0.241±0.038 vs 0.377±0.063;mRNA:0.241±0.038 vs 0.377±0.063,0.065 5±0.003 8 vs 0.075 0±0.004 1,P<0.01).结论 E2F1异常高表达参与了高氧致CLD鼠肺成纤维细胞过度增殖的病理过程,在肺间质纤维化的发生发展过程中发挥重要作用.
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p16~(INK4a)基因在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达
目的 探讨p16~(INK4a)基因在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达.方法 足月新生SD大鼠于生后12 h内分别持续吸入0.85高氧和空气,于3,7,14,21 d随机处死动物后,进行肺成纤维细胞的原代培养,应用流式细胞仪测细胞周期;免疫组化、Western blot法检测p16~(INK4a)蛋白表达;real-time PCR法检测p16~(INK4a) mRNA含量变化.结果 生后3 d时2组p16~(INK4a)蛋白及mRNA的表达无明显差异(P>0.05),生后7 d时高氧组表达开始减少(P<0.05),14 d、21 d明显减少(P<0.01).结论 高氧可下调肺成纤维细胞p16~(INK4a)基因的表达,使得其抑制细胞增殖的作用减弱,肺成纤维细胞过度增殖,终导致肺纤维化的发生.
关键词： 高氧 早产儿慢性肺疾病 p16~(INK4a)基因 肺成纤维细胞 -
新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞P16-RB-E2F1通路的改变
目的 探讨新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞(lung fibroblasts,LF)P16-RB-E2F1蛋白信号传导通路的改变.方法 足月新生SD大鼠于生后12 h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14和21 d随机处死动物,无菌条件下采集肺组织,进行LF细胞的原代培养,应用免疫组织化学、Western blotting法检测P16、RB、E2F1蛋白表达；Real-time PCR法检测其mRNA含量.免疫组织化学法检测磷酸化RB蛋白(p-RBser-795)表达.结果 高氧组与空气组相比,生后7d时高氧组P16蛋白及mRNA表达开始减少,E2F1表达增加(P＜0.05),14d和21 d时P16蛋白及mRNA表达明显减少,E2F1表达则明显增加(P＜0.01)；各实验组LF的总RB蛋白表达无明显差异(P＞0.05),生后7d时高氧组p-RB蛋白表达增加(P＜0.05),14d和21 d时明显增加(P＜0.01).结论 高氧可能通过肺成纤维细胞P16基因表达失活,导致RB蛋白磷酸化(Rb灭活),E2F1基因表达水平增加,LF过度增殖终导致肺间质纤维化.
关键词： 高氧 早产儿慢性肺疾病 P16-RB-E2F1通路 肺成纤维细胞 -
CLD鼠肺成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究
目的 建立一套可靠的CLD鼠肺成纤维细胞(1ung fibroblasts,LFs)分离、纯化和培养技术,并对其生物学行为进行研究,为高氧致肺间质纤维化体外研究提供平台.方法 足月新生Wister大鼠生后即分别持续吸入85%氧或空气,于7 d、14 d、21 d分别进行鼠肺LFs原代培养.绘制细胞生长曲线、计算细胞分裂指数、流式细胞术检测细胞周期.结果 与空气组相比,高氧组LFs增殖速度增快,处于分裂期的细胞数增多,细胞周期中处于G1期细胞的比率逐渐减少,S期细胞比率增加,且呈时间依赖关系.结论 本方法培养的LFs可用于CLD肺间质纤维化发病机制的体外研究;高氧可诱发LFs细胞周期紊乱,细胞异常增生.
