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不同条件体外培养的视网膜组织中NO及其合成酶变化
目的:观察不同成份的培养液对成年犬视网膜组织进行体外培养的前后NO及其合成酶的改变,旨在为视网膜移植提供抗氧化能力的保护性方法.方法:健康成年家犬37只(74眼),将动物随机分成六组,Ⅰ(新鲜视网膜组)Ⅱ(常规培养液组)Ⅲ(高浓度OCE组)Ⅳ(低浓度OCE组)Ⅴ(高浓度全脑组织提取液组)Ⅵ(低浓度全脑组织提取液组)培养一周.六组视网膜组织匀浆,离心,取上清液后进行NO、NOS生化指标的测定.结果:Ⅰ～Ⅵ组视网膜组织NO、NOS含量差异有显著性.与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组NO、NOS值显著增高;与Ⅱ组相比Ⅲ、Ⅳ组NO、NOS值显著降低;且Ⅳ组与Ⅰ组NO值无统计学差异.Ⅳ组与Ⅲ组比较,NOS值降低明显.结论:成年犬OCE中含有清除自由基、增强抗氧化能力的特殊物质.并且低浓度OCE较高浓度OCE对体外培养的视网膜组织抵抗NO的能力显著.
关键词： 视中枢提取液 体外培养的视网膜组织 NO及其合成酶 抗氧化作用 -
OCE对体外培养的视网膜组织保护作用的观察
目的:观察不同成分的培养液进行成年犬视网膜组织体外培养前后的组织形态学及SOD、MDA变化,旨在为视网膜移植提供抗氧化能力的保护性方法.方法:健康成年家犬37只(74眼).动物随机分成6组,即Ⅰ:新鲜视网膜组;Ⅱ:常规培养液组;Ⅲ:高浓度OCE组;Ⅳ:低浓度OCE组;Ⅴ:高浓度全脑组织提取液组;Ⅵ:低浓度全脑组织提取液组,各组均培养1周后进行组织形态学观察以及SOD、MDA生化指标的测定.结果:Ⅱ组视网膜大量细胞坏死.Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组Ⅲ组显示各层比Ⅱ组略好.Ⅳ组视网膜各层排列紧密,其中内核层及外核层细胞数量明显增多,且未见坏死细胞;高倍镜下显示结构完整.Ⅰ～Ⅵ组视网膜组织SOD值、MDA含量差异有显著性,与Ⅰ组比较Ⅱ组SOD值显著下降,Ⅱ组MDA显著增高.Ⅳ组SOD值显著增高,且明显高于新鲜视网膜组,MDA值显著降低,与Ⅰ组无统计学差异.结论:成年犬OCE中含有清除自由基、增强抗氧化能力的特殊物质.并且低浓度OCE较高浓度OCE对体外培养的视网膜组织抗氧化作用显著.
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视中枢提取液对体外培养的视网膜组织的一氧化氮及其合成酶的影响
目的:观察不同成分的培养液对成年犬体外培养的视网膜组织的NO及其合成酶的影响，旨在为视网膜移植提供抗氧化能力的保护性方法。 方法:健康成年家犬31只（62眼），将动物随机分成6组，Ⅰ（新鲜视网膜组）、Ⅱ（常规培养液组）、Ⅲ（高浓度视中枢提取液组）、Ⅳ（低浓度视中枢提取液组）、Ⅴ（高浓度全脑组织提取液组）、Ⅵ（低浓度全脑组织提取液组），将各组视网膜组织块放入相应培养基中培养一周。6组视网膜取材后进行NO、NOS生化指标的测定。 结果:Ⅰ～Ⅵ组视网膜组织NO、NOS 含量差异有显著性，与Ⅰ组相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组NO、NOS 值显著增高；与Ⅱ组相比，Ⅲ、Ⅳ组NO、NOS 值显著降低；且Ⅳ组与Ⅰ组NO值统计学差异无显著性意义。Ⅳ组与Ⅲ组比较，NOS 值降低明显。结论：成年犬OCE中含有清除自由基、增强抗氧化能力的特殊物质。并且低浓度OCE较高浓度OCE对体外培养的视网膜组织抗氧化作用显著。
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视中枢提取液有效成分的鉴定及其对体外培养视网膜组织的影响
目的 鉴定视中提取液(OCE)的有效成分,观察鉴定的不同可溶性因子及低浓度OCE对体外培养视网膜组织的形态学影响,旨在为胚胎全层视网膜移植提供有效的保护性方法.方法 制备OCE,采用SDS-PAGE电泳对OCE进行分离,通过Western blotting对OCE成分进一步鉴定.选用健康成年家犬20只(40眼),随机分成4组,即Ⅰ组:正常视网膜组;Ⅱ组:10%小牛血清1640培养液组;Ⅲ组:可溶性因子培养组;Ⅳ组:低浓度(1.25%)OCE培养组,各组均培养一周后进行组织形态学观察.结果 SDS-PAGE电泳图谱观察,在140 kD、22.8 kD和16.4 kD处形成3条蛋白质特征带,Western blotting显示在OCE中有7s NGF、CNTF和bFGF的阳性表达.不同培养条件下,Ⅱ组各层细胞间连接疏松,结构紊乱,出现裂解现象,大量细胞坏死,视细胞胞核固缩、胞膜不完整,线粒体空泡变,内质网扩张;Ⅳ组各层细胞连接紧密,视细胞数明显增多,节细胞无明显坏死现象,核膜完整,线粒体丰富.Ⅲ组细胞和细胞器形态结构介于Ⅱ组和Ⅳ组之间.结论 OCE中至少含有NGF、CNTF和FGF等成分,低浓度OCE有促进体外培养视网膜组织感光细胞增殖的保护作用.
