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色素痣脱细胞真皮基质制备方法的实验研究
目的 通过对色素痣组织的脱细胞处理,制备一种能够避免异种和同种异体脱细胞真皮基质缺点的自体脱细胞真皮,为自体组织回植修复组织缺损提供实验依据.方法 将手术切除的1例患者的色素痣组织,切取2cm×2cm大小的色素痣25块,置于0.25% DispaseⅡ试剂中,室温下消化24h,去除表皮后,随机分成5个组,分别置于0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%Triton X-100试剂中室温下消化.于不同的作用时间,取标本进行光镜、扫描电镜、透射电镜等检测.结果 色素痣组织在0.25%DispaseⅡ室温下作用24h,去除表皮,再分别用不同浓度的Triton X-100处理48～72h,可有效地去除色素痣组织中的痣细胞及其他所有细胞成分.光镜下胶原纤维粗细均匀,排列规整,无明显变性.扫描电镜观察可见起伏的皮肤纹理及天然毛孔结构,胶原纤维完整而连续,呈规律排列,相互交织成疏松立体网状结构.透射电镜观察胶原纤维粗细均匀,结构清晰,排列规整,可见细胞脱除后留下的腔隙,未见任何细胞碎片的残留.结论 用Triton X-100处理经DispaseⅡ消化去表皮的色素痣组织,当Triton X-100浓度超过0.5%以及Triton X-100作用时间超过48h,可有效地去除色素痣组织中的痣细胞及其他所有细胞成分,进一步增加Triton X-100浓度和脱细胞时间对脱细胞的效果无明显影响.
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Dispase Ⅱ消化法原代培养兔结膜上皮细胞及鉴定
目的 研究Dispase Ⅱ消化法原代培养兔结膜上皮细胞,观察其体外生长特性.并采用免疫组织化学染色鉴定培养的上皮细胞.方法 Dispase Ⅱ消化法原代培养兔结膜上皮细胞,观祭不同时期细胞的生长情况、细胞形态,做广谱角蛋白、MUC5AC免疫荧光染色及PAS染色鉴定;并比较不同部位结膜上皮细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达阳性情况.结果 DispaseⅡ消化法能够获得大量的较纯净的结膜上皮细胞,细胞生长增殖快,能传代4～5代;绝大多数细胞广谱角蛋白免疫荧光染色阳性,少数细胞MUC5AC表达阳性及PAS染色阳性.睑结膜、穹隆部结膜和球结膜细胞PCNA阳性率分别为:(32.14±1.69)%、(27.67 4±1.20)%、(22.76 4±1.73)%,兔睑结膜上皮细胞PCNA阳性率较穹隆部及球结膜上皮细胞的PCNA阳性率高,各部位PCNA阳性率间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DispaseⅡ消化法是进行体外结膜上皮细胞培养的理想方法,兔眼睑结膜处可能存在结膜干细胞.
