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内源性蛋白文献资料
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肺炎衣原体CPn0308的基因克隆及其内源性蛋白定位的研究
目的 克隆肺炎表原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位.方法 根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的 基因,用BamHI/NotI对克隆的目的 基因和pGEX-6P2载体进行酶切,T4连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue细菌;用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,后对插入片断进行序列分析;用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA对内源性蛋白进行定位分析.结果 克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上.结论 成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上.
